细胞系

摘要： 为了构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的Marc-145细胞系,以PRRSV全长感染性克隆为模板,通过PCR方法扩增PRRSV N基因,将N基因克隆到慢病毒载体中,获得重组质粒pLenti-CMV-N,利用三质粒慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒转导至Marc-145细胞,用潮霉素B初步筛选阳性细胞,采用终点稀释的方法筛选出稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系。通过的PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,IFA和Western blot试验验证了N蛋白在细胞系中稳定表达。为此,我们成功获得了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系。

摘要： 目的:建立1株人舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1并鉴定其基本生物学特性。方法:将所获得的舌鳞状细胞癌患者手术切除的组织块标本进行原代培养,传代后建立舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1,显微镜下观察并记录其细胞形态和生长特性,行基因组DNA短串联重复序列分析,并对其倍增时间、凝集反应、细胞表面标记物、染色体核型和裸鼠成瘤能力等特性进行检测。结果:WU-TSC-1可稳定传代50余代,为人源肿瘤细胞,无其他细胞交叉污染。细胞呈卵圆形或方圆形,失去接触抑制。染色体核型为非二倍体染色体。体外细胞倍增时间为51.15 h,体内具有成瘤能力。结论:该研究成功建立了1株人舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1,为揭示舌鳞状细胞癌的发病机制,探索诊断指标和治疗方案提供了新的实验细胞系。

摘要： 目的探讨核糖体合成调控因子1(RRS1)对乳腺癌细胞顺铂抗性的影响及其作用的分子机制。方法通过Western blot和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测人乳腺癌细胞MCF-7和人耐顺铂乳腺癌MCF-7(MCF-7/DDP)细胞中RRS1 mRNA及蛋白的表达水平;利用慢病毒感染的方法沉默RRS1基因,采用Western blot和RT-qPCR方法检测对照组(感染慢病毒shRNA-Ctrl)和RRS1-shRNA组(感染慢病毒shRNA-RRS1)细胞中RRS1 mRNA和蛋白表达水平,计算RRS1基因敲降效率;采用CCK8方法检测对照组和RRS1-shRNA组细胞的增殖能力及顺铂对两组细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用流式细胞仪检测对照组和RRS1-shRNA组细胞的周期分布和凋亡率;采用Western blot法检测对照组和RRS1-shRNA组细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白、磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)蛋白、凋亡抑制蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白、促凋亡蛋白Bcl-2关联X(BAX)蛋白相对表达水平。结果MCF-7和MCF-7/DDP细胞中RRS1 mRNA和蛋白表达量比较差异均有显著性(t=13.50、8.29,P<0.05);对照组和RRS1-shRNA组细胞中RRS1 mRNA和蛋白表达量比较差异均有显著性(t=86.83、6.55,P<0.05),RRS1基因的敲降效率约在70%以上;两组细胞比较,顺铂对MCF-7/DDP细胞的IC_(50)值、细胞增殖能力、细胞周期分布、细胞凋亡率及P-ERK蛋白、Bcl-2蛋白和BAX蛋白的表达水平比较差异均有显著性(t=3.06~8.83,F=17.33、70.35,P<0.05)。结论RRS1基因可能参与了乳腺癌细胞的顺铂抗性过程,其作用可能与RRS1基因高表达引起的细胞凋亡抵抗有关,对临床上提高顺铂疗效具有重要意义。

摘要： 目的探讨环状RNA(circRNA)在缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为A~F组,分别进行缺氧0、1、3、6、12、24 h处理后,再进行6 h复氧,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒及Western blot方法检测H/R处理的H9c2细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白表达水平,确定诱导H9c2细胞焦亡的最佳缺氧时间。将H9c2细胞分为对照组和实验组,对照组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,实验组H9c2细胞置于厌氧培养箱进行H/R处理,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测两组H9c2细胞中circRNA的表达水平。将H9c2细胞分为G~I组,G组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,H组转染对照siRNA(NC),I组转染mmu_circ_0000723特异性siRNA(siRNA-mmu_circ_0000723)。转染24 h后,采用RT-qPCR方法检测各组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达水平。将H9c2细胞分为J~M组,J组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,K组H9c2细胞置于厌氧培养箱进行H/R处理,L组和M组H9c2细胞分别转染对照NC和siRNA-mmu_circ_0000723,并于转染24 h后进行H/R处理。分别采用碘化丙啶(PI)染色、LDH试剂盒和Western blot方法检测J~M组的PI阳性细胞比率、细胞上清液中LDH活性,以及焦亡相关蛋白的表达水平。结果A~F组H9c2细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白的表达水平差异有显著性(F=24.86~2153.00,P0.05)。结论mmu_circ_0000723通过调控焦亡相关蛋白的表达,在H/R诱发的H9c2细胞焦亡中发挥重要作用。

摘要： 鱼类细胞是开展鱼类病毒分离鉴定、功能基因分析以及生物制品制备等研究的重要物质基础。鳜(Siniperca chuatsi)是深受养殖者和消费者欢迎的养殖品种。随着鳜鱼养殖产量的逐年增加,其病害问题尤其是病毒病问题也日趋严重,但是,可用于鳜鱼病毒分离和基因功能分析的鳜细胞系缺乏。本研究采用组织块消化法,对来源鳜脑组织的细胞进行原代培养,建立了鳜脑组织细胞系,命名为MFB。MFB细胞在28°C含10%胎牛血清的L-15中已稳定传代超过70次,第25代鳜脑组织细胞的染色体众数为56。采用免疫荧光细胞化学技术(β-tubulin和Neu-N)鉴定MFB细胞的神经元纯度,结果显示,培养的MFB细胞为神经元类细胞。病毒敏感性实验结果显示,鳜蛙虹彩病毒(MFRaIV)、大口黑鲈蛙虹彩病毒(LMBRaIV)和大鲵虹彩病毒(GSIV)均可在MFB细胞中产生典型细胞病变效应,病毒滴度分别为10^(8.68±0.12)、10^(8.36±0.15)、10^(10.15±1.85)TCID_(50)/mL。使用脂质体Lipofectamine^(■)2000将pEGFP-N1转入MFB细胞,转染效率可达20%。本研究建立的鳜脑组织细胞系不仅对多种蛙虹彩病毒敏感,而且转染质粒效率较高,为鳜病毒性病原的分离及基因功能研究奠定了前期基础。

摘要： 目的探讨人类嗜T淋巴细胞病毒1型(human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1)与头颈部腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发病及其远处转移的相关性。方法采用免疫组织化学及Western blot分析伴或不伴有远处转移ACC患者样品、ACC低侵袭力细胞系(SACC-83)、高侵袭力细胞(SACC-LM)及人单核细胞白血病细胞系(THP-1)中HTLV-1 Tax1蛋白、Myb、Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)和维甲酸信号通路蛋白RARA的表达,Pearson分析Tax1蛋白与肺转移及以上信号分子的相关性。结果11例ACC患者Tax1蛋白细胞核阳性表达,4例患者Myb细胞核阳性表达,6例患者Notch1细胞膜和细胞浆阳性表达,8例患者RARA细胞核阳性表达。选取2例ACC和细胞样本进行Western blot验证,1例与免疫组织化学结果不一致。Pearson分析Tax1与RARA蛋白呈正相关,与远处转移呈相关趋势,但与Myb和Notch1表达无显著相关性。结论HTLV-1感染可能影响体内维生素A代谢通路,与ACC患者发生远处转移相关。

摘要： 目的分析长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HCG18对放疗抗拒喉癌的放疗敏感性的影响及作用机制。方法流式细胞术检测喉癌细胞系经过放射后的细胞凋亡率,应用荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测lncRNA HCG18、微小RNA-107(miR-107)和PAG1在喉癌细胞中的相对表达含量,分别于喉癌细胞中敲除和过表达HCG18、miR-107和PAG1,用克隆形成等检测其对喉癌细胞放疗敏感性的影响。利用实时荧光qRT-PCR和蛋白质印迹法检测HCG18对miR-107及PAG1表达的影响,并运用荧光素酶报告实验分析HCG18/miR-107/PAG1之间的调控作用。结果Tu212max细胞系细胞凋亡率低于Tu212和Tu212min细胞系,将其选定为放疗抗拒的喉癌细胞系。HCG18和PAG1在喉癌组织和Tu212max中表达上调,miR-107在喉癌组织和Tu212max中表达下调(t=22.60、18.15、14.38,P均<0.05)。在Tu212max中沉默HCG18和PAG1的表达能够抑制Tu212max克隆(P均<0.05)、提高凋亡率(t=35.55、24.25、51.44、49.75,P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实HCG18可负向调控miR-107的表达(t=32.46,P<0.05),miR-107可以负向调控其下游靶基因PAG1的表达水平(t=34.71,P<0.05),HCG18通过调控miR-107而并正向调控PAG1的表达水平。HCG18对Tu212ma x放射敏感性的影响又依赖于m i R-107。结论沉默HCG18表达,促进miR-107上调,而抑制PAG1的表达,最终提高了放疗抗拒喉癌细胞的放射敏感性。

摘要： 目的探讨PIWIL样蛋白2(PIWIL2)基因在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)中的表达及慢病毒介导的短发夹RNA敲低PIWIL2基因对HB细胞生物学行为的影响。方法收集2015年7月—2020年12月青岛大学附属医院小儿外科收治的33例HB患儿肿瘤组织及瘤旁正常组织标本,采用免疫组织化学方法检测两种组织中PIWIL2蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR方法检测HB细胞HUH6与正常肝细胞LO2中PIWIL2 mRNA的表达。分别以shRNA-PIWIL2慢病毒和阴性对照慢病毒感染HUH6细胞,分为实验组和对照组,采用克隆形成实验、CCK-8实验、Transwell迁移实验检测两组细胞的增殖、迁移能力。结果HB肿瘤组织中PIWIL2蛋白表达水平显著高于瘤旁正常组织(t=7.16,P<0.05)。HB细胞HUH6中PIWIL2 mRNA表达水平显著高于正常肝细胞LO2(t=20.77,P<0.05)。与对照组相比,实验组细胞增殖能力减弱(t=7.62,F=17.68、165.40,P<0.05),细胞迁移能力降低(t=20.05,P<0.05)。结论PIWIL2在HB肿瘤组织及HB细胞HUH6中高表达,敲低PIWIL2能明显抑制HUH6细胞增殖,细胞迁移能力降低。

摘要： 目的制备一种可降解谷胱甘肽(GSH)、升高细胞内活性氧(ROS)的FeSe_(2)纳米粒子,并探究其对膀胱癌T24细胞的抑制作用。方法以乙醇胺为溶剂,用氯化亚铁和硒粉一步水热法合成FeSe_(2)纳米粒子,对FeSe_(2)进行透射电镜、X射线衍射表征;采用噻唑蓝(MTT)法检测FeSe_(2)纳米粒子对T24细胞和人正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞活性的影响;采用5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)法检测FeSe_(2)在试管中与GSH共孵育后GSH含量变化;采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)与2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)双染检测T24细胞内ROS水平;采用MTT法检测铁死亡抑制剂Ferrostatin-1干预后,FeSe_(2)对T24细胞活性的影响。结果成功合成了直径10~20 nm的FeSe_(2)纳米粒子,该粒子对T24细胞活性的抑制作用强于对SV-HUC-1细胞活性的抑制作用(F=868.60,P<0.05);FeSe_(2)在试管中与GSH共孵育后可降低GSH的含量,并可升高T24细胞内ROS的水平;Ferrostatin-1可逆转FeSe_(2)对膀胱癌T24细胞的抑制作用。结论本研究采用一步水热法成功合成了粒径小、结晶度高的FeSe_(2)粒子,该粒子可通过降解胞外GSH,升高胞内ROS水平,实现对膀胱癌T24细胞活性的抑制作用。

摘要： 目的:使用PiggyBac(PB)转座系统在HEK293T细胞中敲入腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因,构建稳定表达ABEmax基因的工具细胞系.方法:根据PB转座原理,将ABEmax基因和抗生素筛选基因以同源重组的方法插入到PB质粒内,构建pPB-ABEmax真核重组表达质粒.将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中,利用嘌呤霉素抗性筛选细胞,流式细胞仪分选单克隆细胞.单细胞扩增培养后,利用PCR鉴定ABEmax基因的插入水平,RT-qPCR鉴定ABEmax的表达水平以及利用sgRNA测试工具细胞的编辑水平.结果:成功构建pPB-ABEmax真核重组表达质粒,筛选出特异性插入ABEmax基因的HEK293T细胞系,HEK293T-ABEmax的基因编辑效率与HEK293T细胞转染Test-sgRNA与ABEmax的对照组无统计学差别(P>0.05).结论:利用PiggyBac基因编辑技术成功构建并获得了腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因稳定表达细胞系.

摘要： 目的：研究miR-3653-3p在人肺癌细胞系中的作用及调节. 方法：比较了正常细胞和肺癌细胞中miR-3653-3p的表达和启动子区DNA甲基化水平,并通过基因过表达和敲除技术观察肿瘤恶性表型变化. 结果：qRT-PCR结果显示,与肺正常细胞相比,miR-3653-3p在三种肺癌细胞H460、A549和SK-MES-1中的表达量分别为67.74％、28.99％和11.72％,亚硫酸氢盐测序结果表明,miR-3653-3p启动子区DNA甲基化水平分别为61.43％、80％和100％.通过构建和分别转染miR-3653-3p过表达载体miR-3653-pIRES2-EGFP或敲除载体miR-3653-gRNA,结果表明,过表达miR-3653-3p后细胞增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力显著降低,而敲除miR-3653-3p后结果相反.经MirTarget2软件预测BRWD1为miR-3653-3p的靶基因,qRT-PCR结果显示,过表达miR-3653-3p后A549或H460中BRWD1表达量分别降低了31.93％和52.05％,敲除miR-3653-3p后BRWD1表达量分别升高了71.87％和53.44％. 结论：miR-3653-3p在肺癌细胞中低表达与其启动子区DNA甲基化水平负相关,miR-3653-3p可能通过靶向作用BRWD1发挥抑癌作用.

摘要： 目的：本研究通过慢病毒载体系统构建了稳定表达鸡BCRP的MDCK细胞系MDCK-chBCRP,为鸡BCRP底物筛选及药物间相互作用研究奠定基础. 方法：试验首先构建含鸡BCRP慢病毒的表达载体并转染293T细胞得到含鸡BCRP的慢病毒.所得病毒感染MDCK细胞,经含1μg/mL的嘌呤霉素培养液筛选后得到稳定表达鸡BCRP转运体的MDCK细胞模型MDCK-chBCRPo Western Blot、荧光显微镜和流式法检测BCRP蛋白表达.对BCRP经典底物米托蒽醌的敏感性及蓄积能力进行蛋白功能的验证.最后运用构建好的细胞系对鸡常用药物进行BCRP底物的筛选. 结果：成功构建了含鸡BCRP慢病毒的表达载体,并通过转染293T细胞后获得滴度为2.77x106IU/mL的慢病毒.Western Blot、荧光显微镜和流式法检测结果显示鸡BCRP蛋白高表达于MDCK细胞系.米托蒽醌的敏感性及蓄积能力实验结果显示,转染BCRP基因后MDCK细胞对米托蒽醌耐药性明显提高(P＜0.01),并且BCRP蛋白能显著高效外排BCRP底物米托蒽醌(P＜0.05),显示良好的生物活性功能.底物筛选结果显示替米考星、氟苯尼考的净外排率大于2,可能是是鸡BCRP底物,恩诺沙星、阿莫西林的净外排率小于2,可能不是鸡BCRP底物. 结论：成功构建了稳定表达鸡BCRP的MDCK细胞系,并可用于鸡BCRP底物的筛选.

摘要： HEK293细胞是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad5)DNA的永生化细胞,表达转染的腺病毒5的基因,是加拿大McMaster University的F.L.Graham与J.S.Miley于1976年用DNA转染技术构建而成,细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖,是最常用于包装及扩增腺病毒载体的工具细胞.鉴于HEK293细胞在基因研究及生物制品研发中的应用越来越广,而由此细胞派生出来的适应各种研究的细胞系也越来越多,下面将对HEK293细胞派生的各细胞系进行主要功能区分,以达到对HEK293细胞有更清晰的认识.不同的细胞系其具体的培养方式不尽相同，其效果功能也不一样，想要高效地应用HEK 293细胞进行研究，需按研究的目的要求选择相对应的细胞系，以确保研究的适用性。一般来说，研究机构自主驯化HEK 293细胞而形成的各种细胞系均会添加后缀以示区分，具有小范围内使用的特性。以上介绍的几种细胞系为较常见的HEK 293细胞，是大多数研究者可能使用得到的细胞系，希望通过此文能够帮助人们对HEK 293细胞有更清晰的认识，并对其在研究上有所帮助。

摘要： 目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族成员.它能较特异地诱导肿瘤细胞的凋亡,而对大多数正常组织细胞没有影响,是当今肿瘤治疗的热点之一.前期研究发现,多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)细胞株RPMI8226对TRAIL敏感,而U266对TRAIL耐药.为进一步探讨rmhTRAIL对多发性骨髓瘤细胞系的作用靶点及耐药相关蛋白,设计并实施了本研究.rn 方法：取对数生长期的RPMI82“细胞和U266细胞，分别加入浓度为15.625ng/mL与1000ng/mL的rmhTRAIL作用24h，并分别设置平行空白对照组。rn 结果：1.质谱结果：使用Sequest软件针对人类蛋白质数据库IPI Database搜索DTA文件，根据所设定参数，在四组细胞中共鉴定出2376种蛋白，其中2365种为四组细胞所共有，存于不同组别的11种蛋白功能并无特殊意义。利用在线生物信息学分析工具PANTHER对鉴定出的蛋白进行功能鉴定及初步分类，显示其中共有1430种功能明确的蛋白质。参与16类包括细胞周期、凋亡、增殖等在内的生物学过程及123种信号通路，执行多种不同生物学功能。2.rmhTRAIL,作用靶蛋白：在rmhTRAIL作用于敏感细胞株RPMI8226前后，共有351种差异蛋白;而在rmhTRAIL作用于耐药细胞株U2“前后，共有677种差异蛋白。将这两组差异蛋白再次比较，并对其中的凋亡相关蛋白进行进一步分析。rn 结果：显示，ASC,BAP31,PEF1,CPNS1,SEC20等5种促凋亡蛋白在rmhTRAIL作用后的敏感细胞株RPMI8226细胞中表达上调，而在耐药细胞株U266中无明显变化，提示这些促凋亡蛋白为rmhTRAIL作用于RPMI8226细胞的主要靶蛋白。rn 结论：rmhTRAIL诱导RPMI8226细胞凋t的可能靶蛋白为ASC,BAP31,PEF1,CPNS1,SEC200U266细胞对rmhTRAIL的可能耐药机制为泛素-蛋白酶体通路的过表达。

摘要： 为了构建稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白的哺乳动物细胞系及研制鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗,本研究构建了鸭坦布苏病毒prM-E蛋白基因真核表达质粒,转染BHK-21细胞后经免疫荧光与western blot筛选,获得了稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白的细胞系.分析细胞表明细胞系表达蛋白分泌至细胞培养上清液中,表达量高且稳定,细胞传代结果分析表达该细胞系在经多次传代后仍保持大于90％的阳性细胞率.表达产物与佐剂配制成疫苗免疫鸭后能诱导免疫鸭产生病毒中和抗体,免疫鸭能抵抗病毒攻击.该细胞系的构建为鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗的研制提供了基础.

摘要： 胰腺癌细胞系中绝大部分为胰腺导管腺癌细胞系,由于每个细胞系的特殊结构及不同的生物学特性,使其具有特殊意义,对在体外研究胰腺癌病因、发病机制及诊断治疗大有益处.回顾了国内外胰腺导管腺癌的细胞系的建系情况，探讨了细胞系的建立方法，分析了目前已建立细胞系及其特点，并阐述了胰腺癌细胞系的用途。并指出由于每个胰腺癌细胞系尤其是来源于导管的胰腺癌细胞系具有特殊结构及不同的生物学特性，因而具有特殊的意义，对我们研究胰腺癌的病因，发病机制及诊断治疗大有裨益。为此，应建立具有自身特色的胰腺癌细胞系。

摘要： 脑脉络丛(CP)上皮细胞是血-脑脊液屏障(BCB)的重要组成,BCB的屏障功能及分泌功能对维持大脑内环境的稳定有重要意义。目前体外建立的脑脉络丛细胞系主要有3种,即Z310、TB-CSBF和CPC-2,其中Z310和TR-CSFB来源于转染了SV40大T抗原基因的大鼠脉络丛原代细胞,具有一定的屏障特征,可用以建立体外BCB模型；而CPC-2来自人脉络丛癌,没有屏障功能只有分泌功能。这三种细胞系在毒理学与药理学研究中被应用来建立体外模型,研究不同物质对BCB的屏障功能及分泌功能的影响及其转运机制.本文就上述细胞系的建立方法、特性及其在毒理药理学研究中的应用进展作一综述.

摘要： 为构建稳定表达猪瘟病毒(CSFV)Npro蛋白的PK-15细胞系，本研究采用PCR方法，以pOKl2／F1-9质粒为模板扩增Npro基因，并引入Flag标签序列，将其连到plRES2-EGFP载体，构建重组质粒pGFP-Npro;通过脂质体将pGFP．Npro转染至PK-15细胞中，利用G418加压筛选、纯化得到稳定表达Npro蛋白的细胞系;连续传代30代后，进行RT—PCR、Western blot和激光共聚焦试验，结果表明获得了稳定表达CSFV Npro蛋白的PK—15细胞系。该细胞系可应用于免疫共沉淀与N印蛋白相互作用的宿主蛋白，为进一步研究CSFV N印的功能奠定了基础。

摘要： 目的:建立HPV16(E6-E7)转基因小鼠肿瘤细胞系并观察其生物学特性。方法:对转基因小鼠HPV16(E6-E7)所形成的肿瘤进行原代培养,体外传代观察,传代40次以上对培养细胸的形杰学、牛长动力学、免疫组织化学、细胞核型和致瘤性等生物学特性进行分析。结果:该细胞系已在体外培养生存1年以上，传100余代;细胞形态多样，以多角形、短梭形为主;染色体核型为非整倍体，众数50-70条;软琼脂集落形成率为18.5％;细胞体外生长倍增时间为47.2h;免疫组织化学检测到HPV16-E6蛋白，而未检出p53,裸鼠移植成瘤率为100％。结论:成功建立了转基因小鼠HPV16(E6-E7)肿瘤细胞系，为HPV发病机制的研究和治疗药物筛选提供了新的可靠材料。

摘要： 研究干细胞核心基因Nanog在乳腺癌干细胞(BCSCs)和非乳腺癌干细胞(Non-BCSCs)中的表达及定位差异以及BCSCs在MCF-7微球体中的分布情况.

摘要： 本公开涉及一种通过类器官驯化培养结直肠癌细胞系的方法，利用类器官载体和驯化培养基对结直肠癌类器官中的结直肠癌单细胞进行多次驯化培养，在驯化培养过程中渐次降低类器官载体的使用量，使得结直肠癌类器官中的结直肠癌单细胞逐渐适应二维培养环境，并最终被驯化成永生化的结直肠癌细胞系。本公开创造性提出了一种全新的通过类器官驯化培养结直肠癌细胞系的方法，该方法能够显著缩短结直肠癌细胞系的建系时间、提升结直肠癌细胞系的建系成功率；此外，该方法的培养条件简单，容易实现，能够在体外低成本、高效率地从原代细胞建立人源结直肠癌细胞系。

摘要： 本发明涉及一种大菱鲆肝实质细胞系的建立方法及细胞系，所述方法包括获取大菱鲆的肝组织，将肝组织剪成组织块并冲洗，采用四型胶原酶消化处理并再次冲洗，采用胰蛋白酶对消化处理后得到的组织块再次消化处理，加入原代完全培养基终止消化，得到处理后的组织块；将处理后的组织块均匀的贴到培养瓶中，将贴好的培养瓶置于23摄氏度的培养箱中6h，再将培养瓶倒置6h，正置后加入4ml原代完全培养基中进行原代培养再进行传代培养。通过本发明建立的大菱鲆肝实质细胞系能够实现连续传代，从而提供大量的大菱鲆肝细胞；建立稳定可持续的大菱鲆肝细胞系能够将其应用于大菱鲆营养代谢的分子细胞生物学研究中，从而在细胞水平上弥补现有技术的不足。

摘要： 本发明公开了人NF2‑/‑前庭神经鞘瘤施旺细胞系的建立方法及其细胞系。该建立方法包括：A、对肿瘤中的施万细胞(Schwann cel l)进行分离，获得人NF2‑/‑的原代施万细胞(human NF2‑/‑Schwann cel l)进行原代培养；B、建立免疫缺陷小鼠坐骨神经人NF2‑/‑原代施万细胞移植瘤模型；C、从小鼠坐骨神经上筛选直径大于1cm的移植瘤；D、分离施万细胞，进行原代细胞培养；E、进行连续5代以上传代培养；F、在筛选获得与人NF2‑/‑的原代施万细胞、移植瘤原代细胞株细胞形态及主要生物学特征一致，并且能无限传代的NF2‑/‑前庭神经施旺细胞。该细胞有95％以上的成功率长出移植瘤。

摘要： 本发明涉及来自具肝细胞表型能够产生白蛋白和凝血因子的已分化细胞的细胞系，所述细胞源自人白血病细胞系，优选人THP1细胞系，所述细胞保留无限增殖特性。在本发明细胞系中，优选称为PSC－THP1－EP、PSC－THP1－EP－FAST、PSC－THP1－HEP和PSC－THP1－EPEP的细胞系。本发明还涉及用于获得本发明细胞系的方法及所述细胞系的用途，尤其是用于制备白蛋白和/或凝血因子的用途。

摘要： 本发明旨在提供一种珍珠蚌外套膜上皮细胞系制备方法及该细胞系和细胞的应用。该细胞系制备方法为将珍珠蚌即河蚌或海蚌外套膜上皮细胞经体外培养15个月，传代至50代而成；所述珍珠蚌外套膜上皮细胞系保持了珍珠蚌外套膜上皮细胞的形态持点、生长和增殖特性，该培养方法使用最常用的培养基，且在简单的条件下进行原代细胞筛选培养，保证最终获得的细胞无需特殊试剂和条件就能增殖，为其今后的应用提供更好的空间。

摘要： 本发明描述了一种用于获得表达重组马绒毛膜促性腺激素(reCG)激素的哺乳动物细胞系的方法。还描述了一种表达reCG的细胞系、一种用于大规模生产reCG的方法、一种关于PMSG具有更高生物活性的reCG、含有reCG的调配物、编码reCG的核酸和用途。

摘要： 本发明公开了一种从病毒污染的生物体或细胞群体中建立无病毒细胞系的方法，还提供了根据上述方法建立的源自病毒污染的生物体或细胞群体的无病毒细胞系。示例性建立无病毒细胞系的方法包括从病毒污染的生物体或细胞群体中获得细胞，清洗并重悬后分离成单个细胞或多个细胞，将分离所得到的单个细胞或多个细胞在包含利巴韦林的细胞培养基中培养扩增并形成单细胞克隆或多细胞克隆，检测所述细胞克隆或细胞培养基中是否存在病毒，将检测病毒不存在的细胞克隆接种于不含有利巴韦林的细胞培养基中继续培养扩增，从而获得无病毒细胞系。

摘要： 本发明公开了一种从病毒污染的生物体或细胞群体中建立无病毒细胞系的方法，还提供了根据上述方法建立的源自病毒污染的生物体或细胞群体的无病毒细胞系。示例性建立无病毒细胞系的方法包括从病毒污染的生物体或细胞群体中获得细胞，清洗并重悬后分离成单个细胞或多个细胞，将分离所得到的单个细胞或多个细胞在包含金刚烷胺类化合物的细胞培养基中培养扩增并形成单细胞克隆或多细胞克隆，检测所述细胞克隆或细胞培养基中是否存在病毒，将检测病毒不存在的细胞克隆接种于不含有金刚烷胺类化合物的细胞培养基中继续培养扩增，从而获得无病毒细胞系。

摘要： 本申请属于细胞工程技术领域，具体公开了一种哺乳类食管鳞状上皮永生化细胞系的构建方法、构建的细胞系及其培养的类器官。所述构建方法以原代食管鳞状上皮细胞作为宿主细胞，经含有hTERT基因的cDNA（hTERT cDNA）逆转录病毒感染后，通过选择培养基进行筛选，获得永生化“正常的”细胞系。同时，该细胞系能够培养成正常食管鳞状上皮类器官，为研究哺乳类食管的发育生长、干细胞维持、上皮增殖分化稳态以及食管疾病，特别是食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）的发病机理和治疗药物研发提供了研究基础。

摘要： 本公开涉及一种通过类器官驯化培养结直肠癌细胞系的方法，利用类器官载体和驯化培养基对结直肠癌类器官中的结直肠癌单细胞进行多次驯化培养，在驯化培养过程中渐次降低类器官载体的使用量，使得结直肠癌类器官中的结直肠癌单细胞逐渐适应二维培养环境，并最终被驯化成永生化的结直肠癌细胞系。本公开创造性提出了一种全新的通过类器官驯化培养结直肠癌细胞系的方法，该方法能够显著缩短结直肠癌细胞系的建系时间、提升结直肠癌细胞系的建系成功率；此外，该方法的培养条件简单，容易实现，能够在体外低成本、高效率地从原代细胞建立人源结直肠癌细胞系。