体外培养

摘要： 目的:观察鼠神经生长因子(NGF)对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞活性及形态的影响。方法:体外培养PC12细胞,将其分为阴性对照组和诱导分化组。诱导分化组使用浓度为50 ng/ml NGF,阴性对照组加入等量的磷酸盐缓冲液。采用CCK-8实验检测细胞活性。制作细胞爬片后,于显微镜下直接观察活细胞形态。HE染色后,采用Image J软件对图片进行分析。经神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体荧光染色后,于荧光显微镜下观察细胞染色情况。结果:CCK-8实验显示,诱导分化组PC12细胞活性高于阴性对照组(P<0.001)。经Image J软件分析,诱导分化组PC12细胞贴壁面积大于阴性对照组,突起数量多于阴性对照组,轴突长度长于阴性对照组(均P<0.001)。PC12细胞诱导分化后的类神经元样细胞经NSE抗体染色后,在荧光显微镜下可见胞体及轴突均被染色。结论:鼠NGF诱导后PC12细胞活性增加,细胞贴壁面积增加,细胞轴突增多、增长,为后续研究提供了基础。

摘要： 目的:探讨不同浓度胎牛血清体外培养对原代心肌成纤维细胞增殖和分化的影响。方法:用酶消及差速贴壁法分离并培养SD乳鼠心肌成纤维细胞;采用不同浓度胎牛血清(1%、5%、10%和20%)培养心肌成纤维细胞并观察细胞形态,免疫荧光共聚焦法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达,划痕实验检测心肌成纤维细胞的迁移能力,CCK8实验检测心肌成纤维细胞的增殖能力。结果:随着胎牛血清浓度升高,细胞形态逐渐变圆,细胞表面积增加,α-SMA阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞分化增多,细胞迁移能力增加。高浓度胎牛血清(20%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最旺盛,低浓度胎牛血清(1%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最低,5%和10%胎牛血清培养时心肌成纤维细胞增殖均旺盛。结论:高浓度胎牛血清培养会导致心肌成纤维细胞分化,5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较10%和20%胎牛血清培养分化程度少,增殖能力较1%胎牛血清好,选用5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较好。

摘要： 目的进行幽门螺杆菌耐药检测及临床根除率相关性分析,指导临床经验性用药。方法选取2020年3月~2021年9月因幽门螺杆菌感染就诊于牡丹江医学院附属红旗医院的86名患者,行幽门螺杆菌体外培养并行药敏试验。依据药敏结果,41例患者培养出耐药菌株归为药敏治疗组,选择两种敏感抗生素+埃索美拉唑镁肠溶片+枸橼酸铋钾片四联疗法;经验治疗组予以埃索美拉唑镁肠溶片+丽珠维三联疗法。结果对41例药敏治疗组进行药敏试验,左氧氟沙星、甲硝唑耐药率较高。经验治疗组根除率低于药敏治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论左氧氟沙星、甲硝唑的耐药率均较高,不推荐作为首选用药。药敏试验指导下的根除幽门螺杆菌四联疗法可以提高根除率,应鼓励开展体外培养及药敏试验。

摘要： 为建立新西兰白兔毛囊体外培养模型,探究其最适的培养环境,本实验选用2月龄新西兰白兔,采集触须毛囊,分离组织和脂肪,保留完整毛囊。将完整无损的毛囊放入24孔板,每孔1根,加入William’s E、DMEM、MEM3种不同培养基,每组6个重复,每2d在倒置显微镜下观察毛囊毛干的生长,并利用HE和PCNA免疫荧光染色检测毛囊的形态和增殖能力。结果显示:3种培养基中毛囊毛干在体外培养4d后生长减缓,在2 d与4 d时的生长速度均大于6 d(P<0.05)。其中,William’s E组生长速度高于MEM组(P<0.05),且William’s E组生长最快。4 d时,HE染色发现William’s E组毛囊结构完整,毛乳头清晰,而此时DMEM和MEM组毛乳头已经消失。进一步用PCNA免疫荧光染色,发现Williams’E组PCNA在毛乳头阳性表达,DMEM和MEM组毛囊表达仅表达在外根鞘。因此,William’sE培养基最适宜新西兰白兔触须毛囊生长,毛乳头增殖能力最强。

摘要： 浙科版选修3在《胚胎工程》中指出,从卵巢中采集到的是未成熟的卵母细胞,并且要将其培养至成熟才具受精能力,这与必修2中有关卵原细胞形成卵细胞的认知存在一定冲突。本文从生理学的角度对卵原细胞的形成、卵泡的发育、卵母细胞的去向及体外培养4个方面进行释疑。

摘要： 为提高牦牛乳腺上皮细胞体外培养成功率,实现高度可重复性,试验采用2.5 g/L(含0.5 g/L EDTA)胰酶和Ⅰ型胶原酶(1 mg/mL)分段消化牦牛乳腺组织块以分离细胞,原代培养时于DMEM/F12培养体系内添加氢化可的松(1μg/mL)、表皮生长因子(50 ng/mL)及胰岛素-转铁蛋白-硒(5μg/mL),传代时用牦牛乳腺上皮细胞与成纤维细胞对胰酶敏感度及贴壁时间的差异特性进行纯化。采用CCK8法测定细胞生长曲线,细胞免疫荧光技术鉴定细胞分子表型,Western blot技术对细胞进行功能鉴定。结果显示,组合酶分段消化法可获得较多细胞量,激素添加有利于促进细胞贴壁及增殖,分离纯化后的细胞具有正常生长特性,经分子表型及功能鉴定纯化后的细胞可阳性表达角蛋白18及β-酪蛋白,阴性表达角蛋白14及波形蛋白,上述3种激素存在时,细胞可在蛋白质水平表达β-酪蛋白,催乳素可促进其表达,说明成功培养了具有泌乳功能的牦牛乳腺上皮细胞,建立了有效的牦牛乳腺上皮细胞体外培养技术体系,可为以后的相关研究提供参考。

摘要： 单细胞蛋白是从体外培养的单细胞微生物菌体中获得的生物体蛋白质。单细胞蛋白具有蛋白质含量高、氨基酸组成均衡、营养价值高且安全等特点,近年来倍受关注。本文综述了生产单细胞蛋白的关键技术和制备工艺,以及单细胞蛋白的应用现状,以期为单细胞蛋白在水产养殖业中的应用提供参考。

摘要： 目的:研究维生素E(Vit E)对大剂量蓝光诱导人视网膜色素上皮(hRPE)细胞损伤的影响,为减少蓝光损伤hRPE细胞的预后方案提供思路。方法:用3000±150Lx蓝光建立hRPE细胞损伤模型;利用流式细胞术检测照射时间分别为0、3、6、9、12、24h的6组hRPE细胞凋亡率及活性氧相对量;利用流式细胞术检测照射0h组、照射6h组、照射6h前或后加不同浓度Vit E组(Vit E的浓度分别为10、50、100μmol/L)的hRPE细胞凋亡情况和活性氧相对量,并采用Hoechst 33258试剂染色在荧光显微镜下观察hRPE细胞的荧光强度。结果:与照射0h组相比,照射3、6、9、12、24h组的hRPE细胞活性氧相对量明显增加(均P<0.01),照射6、9、12、24h组的hRPE细胞凋亡率也明显增加(均P<0.01),但照射3h组的hRPE细胞凋亡率无明显增加,差异无统计学意义(P=0.46)。与照射6h组相比,除照射6h前加入10μmol/L的hRPE细胞凋亡率(P=0.66)外,其他加Vit E的实验组hRPE细胞活性氧相对量和凋亡率明显减少、细胞中Hoechst 33258释放蓝色荧光逐渐减弱,且呈浓度依赖(均P<0.01)。与照射0h组相比,加Vit E的6组hRPE细胞活性氧相对量和凋亡率有差异(均P<0.01)。同一浓度的Vit E,除10μmol/L Vit E的hRPE细胞凋亡率在照射前或后加无差异(P=0.08)外,照射后加Vit E组比照射前加Vit E组的hRPE细胞活性氧相对量、凋亡率明显减少(均P<0.01)。结论:hRPE细胞经蓝光照射后出现胞内活性氧相对量增多的现象早于细胞凋亡,清除胞内活性氧是减少大剂量蓝光诱导hRPE细胞损伤的思路。Vit E可保护由大剂量蓝光诱导的RPE细胞损伤,这种效应随Vit E浓度增加而增强,且照射后加入比照射前加入的效果更好。但需要一定剂量的Vit E才能显效,而且无法完全修复损伤。

摘要： 【目的】研究催乳素(PRL)对内蒙古绒山羊初级毛囊和次级毛囊体外生长及形态变化的影响。【方法】机械法结合切割法分离内蒙古绒山羊的初级毛囊和次级毛囊,在初级毛囊培养液中分别添加0、5、10、50、100 ng/mL催乳素进行体外培养,每组24根,共培养5 d,每天在显微镜下观察其形态并拍照,统计其生长长度、生长速度和存活率,筛选出最适催乳素处理浓度。然后将初级毛囊与次级毛囊分别分为初级毛囊对照组(PF-K)、初级毛囊试验组(PF-PRL)、次级毛囊对照组(SF-K)、次级毛囊试验组(SF-PRL),每组24根,对照组用基础培养液培养,试验组在基础培养液中添加最适浓度的催乳素,培养5 d,每天观察毛囊的形态并拍照,同时测量各组毛囊的生长长度。【结果】10 ng/mL催乳素组毛囊的平均日生长长度均极显著高于其他浓度组(P<0.01),最终生长长度和存活率均最高,因此,后续试验选择10 ng/mL催乳素处理毛囊。试验组和对照组初/次级毛囊的毛干与根鞘部位同时伸长,随着培养时间的增加均出现不同程度的弯曲。PF-PRL、SF-PRL组毛囊在2~5 d的总长度分别极显著高于PF-K、SF-K组(P<0.01)。PF-K组除第1天与第0天差异不显著外,1~5 d毛囊的总长度依次显著增加(P<0.05);PF-PRL组0~5 d毛囊的总长度依次显著增加(P<0.05)。SF-K组毛囊第5天的总长度显著高于0~4 d(P<0.05);SF-PRL组第4、5天毛囊的总长度均显著高于0~3 d(P<0.05),第3天毛囊的总长度显著高于0~2 d(P<0.05)。PF-PRL、SF-PRL组毛囊在2~5 d的平均日生长长度分别极显著高于PF-K、SF-K组(P<0.01)。【结论】10 ng/mL催乳素是体外促进毛囊生长的最适浓度,10 ng/mL催乳素对体外培养的内蒙古绒山羊的初级毛囊和次级毛囊均有极显著的促生长作用。

摘要： 本实验将葡萄酒花色苷和二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷与人体肠道菌群进行体外模拟发酵,通过16S rRNA测序,比较肠道菌群物种丰度、多样性和功能基因等方面的差异,分析肠道菌群结构与功能的变化,探究葡萄酒花色苷对肠道菌群的影响。结果表明,高浓度葡萄酒花色苷和二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷均可降低Firmicutes/Bacteroidetes(F/B)值,在0~24 h内降幅分别为32.98%和60.43%。葡萄酒花色苷还可有效延缓放线菌门(Actinobacteria)和乳杆菌属(Lactobacillus)相对丰度降低的速率;降低有害菌大肠埃氏菌属-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)和克雷伯氏菌(Klebsiella)的相对丰度,在0~24 h内降幅分别为66.36%和33.33%。同时葡萄酒花色苷和二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷均能提高肠道菌群与新陈代谢相关基因的表达,尤其是脂质代谢和能量代谢。红葡萄酒花色苷可促进肠道益生菌的生长,抑制部分有害菌增殖,调节肠道菌群结构和功能,提高人体肠道新陈代谢能力。

摘要： 原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)是生殖细胞的前体细胞,作为一种生殖干细胞,其具有与胚胎干细胞相似的形态及分化潜能,能进行体外培养及传代,并能在一定前提下保持其未分化状态及全能性.目前对于禽类胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)、胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EGCs)等细胞系的建立还很少,较好的维持PGCs的体外存活和促进其快速增殖,是研究者们现面临的首要问题.本文将对禽PGCs的起源与迁移、体外培养体系以及主要细胞因子对其体外培养作用进行简单的阐述.

摘要： 为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响,分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚.结果表明:子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(p＜0.01),而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(p＜0.05),两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(p＞0.05),说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著,且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法.小鼠早期胚胎发育观察结果表明:超排处理后,在公母鼠合笼后76～79.5h采胚,胚胎大多处于桑椹胚期,而在公母鼠合笼后88～91.5h采胚,胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期;采用TCM199+15％胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的.

摘要： 卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养是牛胚胎体生产的三个主要技术环节,与胚胎的存活及发育能力密切相关,进而影响胚胎移植后效率.本文综述了牛卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养的研究进展,为有关研究和生产提供参考.

摘要： 目的：探讨一种简单有效的培养小鼠原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的方法,以期为研究小鼠模型的PGCs提供充足的材料来源.方法：体外分离出Oct4ΔPE∶GFP转基因小鼠胚胎13.5天的生殖嵴,剪碎后,用含有血清、白血病抑制因子、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂和重组表皮生长因子等的α-MEM培养基进行组织贴壁法培养.结果：经培养后的PGCs的可以获得快速增殖和传代的能力,并且可以通过碱性磷酸酶(AP)和自身Oct4激发荧光鉴定均成阳性表达.结论：利用该培养方案能培养出高纯度且具有良好干性的小鼠PGCs.

摘要： 探讨Sprague-Dawley(SD)大鼠冠状动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)体外培养方法,并建立冠脉VSMCs内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)细胞模型.在无菌条件下分离SD大鼠冠状动脉,剪碎组织,呈块状,贴壁培养.用光学显微镜观察细胞生长的基本形态变化及特征.用免疫荧光技术检测VSMCs分子标志α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle aetin,α-SMA)和平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC).发现采用毒胡萝卜素可成功建立冠状VSMCs内质网应激细胞模型。

摘要： 目的：通过体外分离培养脂肪干细胞,并进行传代、表型鉴定及多向诱导分化,进一步了解其生物学特性,为临床运用奠定实验基础. 方法：取SD大鼠附睾近心端,肾周及腹股沟韧带皮下脂肪组织,采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法,对脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增、表型鉴定及成骨成脂诱导分化,在倒置显微镜下观察原代及传代细胞形态变化,并采用MTT法检测第3、5、7、9代细胞增殖能力,用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记,取第3代细胞进行成骨成脂诱导分化,并采用茜素红染色、油红0染色方法进行鉴定. 结果：采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法得到的脂肪干细胞,其细胞形态较为均一,基本呈长梭形,旋涡状生长,并形成集落样生长.MTT法检测第3、5、7、9代ADSCs呈典型的"S"形增殖曲线,符合干细胞的特性,脂肪干细胞表型鉴定结果显示CD29阳性高表达,CD34阴性表达,CD45低表达,CD105弱阳性表达,脂肪干细胞能向成骨细胞及脂肪细胞分化. 结论：脂肪干细胞取材较方便,含量丰富、并能够在体外分离培养,其稳定表达特异性的表面抗原,并且经过相应诱导培养后可向成骨及成脂多向分化,可作为优良的骨组织工程的种子细胞来源.

摘要： 根据家禽PGCs的迁移路径,分别从孵化24h的鸡胚生殖新月(gcPGC)、2.5d的胚血(cPGC)和5.5d的生殖腺(gPGC)中分离PGCs,置于完全培养液中培养,表达干细胞标志物SSEA-1和生殖细胞特异标志物DAZL,表明成功分离得到PGCs.CCK-8法细胞增殖检测显示,BRL-3A饲养层细胞能明显促进PGCs的体外增殖,与无饲养层条件培养的PGCs间有显著差异,但不同来源PGCs间无增殖速度的差异.检测这3种不同来源PGCs的克隆形成能力,结果显示cPGCs的克隆形成率最高,克隆体积最大.RealTime-PCR结果显示多能性相关基因cNanog和cPouV在gcPGCs中的表达量最高,而生殖相关基因Dazl和Cvh在cPGCs中的表达量最高.结果表明,体外培养的PGC保持其体内遗传状况,即gcPGC的多能性最好,cPGC开始进入生殖系分化,而gPGC可能已部分进入减数分裂.而从培养特性上来看,gcPGC由于数量过少难以扩大培养,而gPGC混合的分化细胞过多,cPGC是体外培养和增殖分化研究的最佳细胞来源.

摘要： 原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)是生殖母细胞的前体细胞,作为一种多能干细胞,具有与胚胎干细胞相似的形态及分化潜能,能在体外进行培养、传代,并在一定条件下保持未分化状态及多能性.现阶段PGCs的体外培养体系中往往存在饲养层细胞和血清,为后期研究造成了困难和混淆.为建立粤黄鸡原始生殖细胞(PGCs)的体外无饲养层培养体系,给体外研究禽类PGCs增殖调控机制打下良好的基础,本研究通过改进培养体系成分分离纯化PGCs并进行体外培养.结果显示,所得无饲养层培养的PGCs直径为6～8μm,生长曲线呈现"S"形,群体倍增时间(3.75±0.15)d,表明PGCs具有良好的增殖生长状态;对分离纯化的PGCs特异性基因胚胎阶段特异性表面抗原(stage specifi embryonic antigen-1,SSEA-1)和类无精症缺失基因(deleted in azoospermia-like,DAZL)进行免疫荧光鉴定,结果显示二者在PGCs均有表达,经化学免疫染色的细胞可观察到绿色的荧光;将无饲养层培养的PGCs用PKH26标记,注射到孵化至17HH-20HH受体鸡胚的背主动脉中,继续孵化至第5.5d,结果显示,分离纯化并通过PKH26标记的鸡胚血液PGCs仍然具有PGCs的特性,可随鸡胚的血液循环定殖于鸡胚性腺中.本研究优化了PGCs体外培养的条件,建立无饲养层无血清培养体系,为家禽PGCs应用于现代保种技术、转基因技术以及家禽的发育生物学等研究领域,提供了重要的技术支持.

摘要： 2015年我国沿海地区爆发了以北京樱桃谷鸭和半番鸭为宿主的新型细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV),NGPV能导致北京樱桃谷鸭和半番鸭患上严重短喙侏儒综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS).对山东送检病鸭的肝、脾、肠道进行病毒分离工作.病鸭表现为消瘦、短喙等症状,剖解内脏器官除胰脏有肿胀出血外其他器官均无明显病理变化.对病料抽提核酸而制备PCR模板,选取GPV的Rep和VP1基因进行PCR扩增,阳性产物送测序,基于获得的序列构建分子遗传进化树,分析发现该株与已报道QH15、DS15和SC16株新型鹅细小病毒遗传关系最为接近,并命名为NGPV/duck/SD/15株.将所分离的病毒在9日龄鸭胚、鸭胚成纤维细胞与鹅胚成纤维细胞上盲传十代以上以获得适应胚与细胞的病毒,发现NGPV/duck/SD/15株能在鸭胚和鸭胚成纤维细胞上有效增殖,但不能在GEF上增殖.

摘要： 细胞的结构与功能受到其所处微环境的影响,主要体现在细胞与细胞间相互作用、细胞与细胞外基质间的相互作用以及体液中各种因子对细胞的作用.其中细胞外基质能够影响细胞的生长、发育与死亡,还可以决定细胞的形状,控制细胞的分化,参与细胞的转移.本研究采用紫外固化的方法制备了基于丙烯酸酯的共聚物涂层以用于hASC的纯化和体外长期培养。hASC在聚（DMC-co-CHMA-co-DEAEMA）（PC2）涂层表面的生长速率最高，且培养3代后，表达干细胞特异性标志物的hASC含量高于在TCP表面培养的干细胞。在PC2涂层表面培养的hASC不仅能保持其干性，而且能大大提高细胞向成骨和成软骨细胞分化的能力。通过对共聚物涂层的水接触角的分析，发现60°左右的水接触角有利于细胞的粘附。与AFM的分析结果相比较，较粗糙的涂层表面比平滑表面对hASC有更好的亲和性，更有利于干细胞的粘附生长。该新型聚合物能够用于hASC的研究和工业化扩增，具有成为干细胞医疗中一种高效、安全和化学组成可控的合成基质，并最终应用于临床的潜力。

摘要： 本发明涉及生物医药工程技术领域，提供了一种于体外长期维持肝细胞功能的培养体系及采用该培养体系进行成熟肝细胞长期体外培养的方法，该培养体系包括如下组分：液体基础培养基、0‑5×B27添加剂、0‑5×N2添加剂、1％青链霉素/链霉素、0‑100mM尼克酰胺、0‑1mM地塞米松、0‑500μg/mL维生素C、0‑10μM Latunculin B、0‑50μM Blebbistatin、0‑50μM Dasatinib、0‑500μM XAV939和0‑10000μM的LY294002。成熟肝细胞长期体外培养的步骤如下：A、预先包被培养支持物并于4°C保存过夜；B、采用含有1％基质胶的培养体系将刚分离肝细胞种植于该培养支持物上，4～6小时后采用含1％基质胶的培养体系换液去除未贴壁细胞，之后每天换液直至第三天，三天后更换为不含基质胶的培养体系换液直至三周。

摘要： 本发明提供一种广州管圆线虫体外培养基，包括虫卵培养基、I期幼虫培养基、III期幼虫培养基、IV期幼虫培养基和V期幼虫培养基，这些培养基中均含有两性霉素B；通过在广州管圆线虫培养中加入两性霉素，可防止体外培养广州管圆线虫的污染，通过将已感染广州管圆线虫60d的大鼠进行解剖处理，挑出血管内的成虫，将成虫清洗后放入虫卵培养基中孵育，孵育一段时间后，挑出成虫，剩余的虫卵置于培养箱中培养7～10d，80%的虫卵可成功发育为I期幼虫，且体外培育的I期幼虫，III期幼虫，IV期幼虫，V期幼虫均可在体外长期存活，本发明的研究为广州管圆线虫的体外研究和应用提供了有效的技术保障。

摘要： 本发明提供了一种脐血NK细胞的体外增殖培养基、体外培养试剂盒和体外培养方法，涉及细胞体外培养技术领域。本发明所述体外增殖培养基不包含动物血清，使用时减少免疫反应，应用更安全。本发明利用所述体外增殖培养基对脐血NK细胞进行体外增殖，操作简单易行，成本低廉，无需包被和分选，不需要滋养层细胞，不含动物源成分，安全性和稳定性好，可用于Ficoll分离的PBMC的直接培养，并得到更多量满足临床使用标准的NK细胞。利用本发明所述体外培养方法制备的NK细胞，CD3‑CD56+细胞表达率高达90％以上，并且高表达NKG2D、NKp30、NKp46等活化性受体，体外杀瘤活性强。

摘要： 本发明属于生物医药领域，涉及一种适用于毛囊干细胞体外培养的培养基配方和用于体外3D毛囊干细胞的培养方法。该培养基以MEM培养基为基础，含有1‑10 ng/ml EGF,1‑30 ng/ml FGF，1‑30 ng/ml VEGF‑A，1‑10μM Y27632,5‑10μg/ml转铁蛋白。此培养基配方及培养方法克服了毛囊干细胞体外培养时传代代数短，细胞分化严重等问题，大幅提高了毛囊干细胞体外培养的细胞数目和并且有效维持了毛囊干细胞的分化潜能。本发明还提供了其应用和体外培养3D毛囊干细胞的方法。

摘要： 本发明公开了一种水牛卵巢皮质体外培养用激活培养基及体外培养方法，本发明的激活培养基是在体外基础培养基中外加bpv(hopic)，其中所述bpv(hopic)的浓度为150μM。本发明的激活培养基能够显著提高原始卵泡向初级卵泡转变的卵泡数，在体外维持次级卵泡向窦性卵泡的发育趋势。

摘要： 本发明涉及免疫细胞治疗领域，特别是涉及一种体外培养TH1细胞的培养液及其应用和TH1细胞的体外培养方法。本发明在开始培养细胞的当天加入单抗CD3、单抗CD28的同时加入CpG‑A ODN、维生素A、肝素、γ‑分泌酶抑制剂DAPT、大蒜新素、IL‑18、IL‑12、IL‑2，能够诱导TH1细胞活化与增殖；在培养过程中不断添加含肝素、IL‑18、IL‑12、IL‑2的无血清培养基，可以进一步促进TH1细胞的生长和增殖，提高TH1细胞的数量，同时使扩增得到的TH细胞保持较好的细胞活性，提高TH1细胞的临床价值。本发明提供的培养液和对应的培养方法能够有效提高体外培养TH1细胞的数量和质量。

摘要： 本发明涉及一种应用于鲩肠袋虫体外培养的培养基、其制备方法以及鲩肠袋虫的培养方法，属于寄生原生动物体外培养技术领域。本发明培养基的配方为：任氏液100ml、酵母提取物0.5g、脉蛋白胨1.0g，胎牛血清3～6ml、马血清6～10ml、地衣芽孢杆菌菌液300～500μl、无菌淀粉200～300mg。本发明虫体培养步骤如下：将提取的鲩肠袋虫接种至配制好的培养基中，充氮气后密封，15°C培养48～72h后将虫体转移至另一个新鲜的培养基中，充氮气密封，15°C培养，如此循环往复，使虫体持续增殖。本发明培养基制备方法简单，稳定性好，虫体在培养基中可实现分裂增殖，为鲩肠袋虫的生理学和实验生态学研究奠定了基础。

摘要： 本发明涉及胚胎培养技术领域，尤其涉及一种非人灵长类胚胎体外培养试剂盒和体外培养方法。本发明提供一种非人灵长类胚胎体外培养试剂盒，包括第一培养基；所述第一培养基包括独立包装的Matrigel和混合试剂；所述混合试剂为IVC1与Geltrex的混合物，且Geltrex在混合试剂中的含量为9‑11％(V/V)；所述IVC1与Geltrex的混合物中IVC1的成分为：DMEM/F12，热灭活FBS，L‑谷氨酰胺,青霉素，链霉素，ITS‑X，β‑雌二醇，孕酮，N‑乙酰‑L‑半胱氨酸。本发明的试剂盒有助于模拟食蟹猴胚胎植入子宫过程，以促进胚胎持续发育。

摘要： 本发明属于人类辅助生殖领域，具体涉及一种人类胚胎体外培养基及提高体外培养人类胚胎发育潜能的方法。所述人类胚胎体外培养基中添加有NMN（β‑烟酰胺单核苷酸）。本发明发现在G1培养基中添加NMN，可以有效提升着床前胚胎中NAD+水平，有效的提升了人类胚胎的发育潜能。

摘要： 本发明涉及生物医药工程技术领域，提供了一种于体外长期维持肝细胞功能的培养体系及采用该培养体系进行成熟肝细胞长期体外培养的方法，该培养体系包括如下组分：液体基础培养基、0‑5×B27添加剂、0‑5×N2添加剂、1％青链霉素/链霉素、0‑100mM尼克酰胺、0‑1mM地塞米松、0‑500μg/mL维生素C、0‑10μM Latunculin B、0‑50μM Blebbistatin、0‑50μM Dasatinib、0‑500μM XAV939和0‑10000μM的LY294002。成熟肝细胞长期体外培养的步骤如下：A、预先包被培养支持物并于4°C保存过夜；B、采用含有1％基质胶的培养体系将刚分离肝细胞种植于该培养支持物上，4～6小时后采用含1％基质胶的培养体系换液去除未贴壁细胞，之后每天换液直至第三天，三天后更换为不含基质胶的培养体系换液直至三周。