乳腺上皮细胞

摘要： 本试验采用猪乳腺上皮细胞作为体外模型探讨亮氨酸对乳成分合成的影响及其分子机制。分别用0(对照组)、1、5和10 mmol/L的亮氨酸处理猪乳腺上皮细胞24和48 h后,检测细胞活力,分析乳蛋白、氨基酸转运载体、葡萄糖转运载体及脂肪酸转运载体的基因表达情况,并进一步检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路中关键蛋白mTOR和核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)的表达和磷酸化情况以期探索体外亮氨酸调控乳成分合成的机制。结果显示:不同浓度亮氨酸处理48 h后细胞活力均较对照组显著提高(P0.05)。与对照组相比,1 mmol/L亮氨酸处理显著提高了S6K1的磷酸化水平(P0.05)。综上可知,在培养基中添加亮氨酸可提高猪乳腺上皮细胞活力,促进乳蛋白、氨基酸转运载体和脂肪酸转运载体基因的表达。

摘要： 蛋氨酸(Met)是奶牛的第一或第二限制性氨基酸,能够通过调控细胞器的形态和活性促进酪蛋白的合成,研究蛋氨酸促进奶牛乳腺中的酪蛋白合成及调控机制具有重要意义。本文综述了目前蛋氨酸的研究概况,分析了其对酪蛋白合成以及对乳腺上皮细胞活性的影响机制,以期为奶牛酪蛋白合成的机制研究提供更多的理论依据。

摘要： 为了探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺上皮细胞中促炎症因子基因表达的影响,试验采用酶消化法将奶牛乳腺上皮细胞分离纯化后分成两组,分别在含0.5 mg/mL葡萄糖和0.5 mg/mL葡萄糖+1μg/mL LPS的完全培养液中培养24 h,采用荧光定量PCR技术检测细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)、诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、乳铁蛋白(lactoferrin,LF)和白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)基因mRNA表达量。结果表明:TGF-β1基因的mRNA相对表达量在两组之间没有显著差异(P>0.05);而TNF-α、iNOS、IL-6、LF和IL-8基因的mRNA相对表达量在LPS刺激后均提高,其中IL-6和LF基因的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),TNF-α、iNOS和IL-8基因的mRNA相对表达量极显著提高(P<0.01)。说明奶牛乳腺上皮细胞受到感染后具有迅速增加诸多先天性免疫因子的能力,以便在乳腺感染的初期可以快速启动免疫识别和信号传递等免疫机制。

摘要： 为探究miR-665在奶牛乳腺上皮细胞炎症中的表达及功能,利用脂多糖(LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞产生炎症反应,在LPS诱导0、3、6和12 h采用qPCR技术检测了miR-665及其潜在靶mRNA的表达水平,并采用生物信息学方法进行了miR-665保守性分析、靶基因预测及其KEGG和GO功能富集分析。结果表明,miR-665在牛、人和小鼠等物种间高度保守;与0 h相比,miR-665在LPS诱导乳腺上皮细胞产生炎症的3、6和12 h的表达量均显著上调,且与促进炎症相关的潜在靶基因(MAPK14、MAP3K2、SMAD2、SP1)的表达量呈相反趋势;miR-665的靶基因预测及其KEGG和GO功能富集结果显示,miR-665可能通过参与MAPK、Th17细胞分化、肿瘤坏死因子等信号通路发挥作用。推测miR-665可能在LPS诱导的乳腺上皮细胞炎症中具有抑制作用。

摘要： 为探明催乳素(PRL)和氧气(O_(2))对大鼠乳腺上皮(HC11)细胞氧化应激的影响及作用机制,试验以大鼠HC11细胞为载体,研究了在有氧和缺氧条件下催乳素对由过氧化氢(H_(2)O_(2))诱发的HC11细胞氧化应激的影响。结果表明:催乳素有利于改善氧化应激对乳腺乳蛋白基因表达的影响,其作用是通过增加抗氧化基因的表达、激活炎症因子的表达和维持葡萄糖转运因子的正常运转而实现的。

摘要： 【背景】MicroRNAs(miRNA)是一类小RNA分子(18—23nt),广泛参与了家畜乳腺发育和泌乳性能的调控。项目组前期在小尾寒羊上应用RNA-Seq研究发现,miR-221在空怀期乳腺组织中的表达量是泌乳期的3.6倍,但是尚不清楚miR-221对绵羊乳腺发育的调控机制。【目的】探讨miR-221是否通过靶向基因IRS1抑制绵羊乳腺上皮细胞的活力和增殖数量,为揭示miR-221对绵羊泌乳性能的分子调控机理提供理论参考。【方法】采集小尾寒羊乳腺、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最长肌和卵巢等8个组织样本,采用实时荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative PCR,RT-qPCR)技术,构建miR-221在绵羊8个组织中的表达谱。采用细胞转染、CCK-8和Edu等方法,研究miR-221对绵羊乳腺上皮细胞活力和增殖的影响。利用miRDB和miRanda数据库,预测miR-221的靶基因,结合功能富集分析,确定目标靶基因,构建靶基因的野生型和突变型载体,进而用双荧光素酶报告实验,验证miR-221与预测靶基因间的靶向关系。分析过表达和沉默miR-221对靶基因及其信号通路下游功能基因的影响。【结果】RT-qPCR结果表明,miR-221在绵羊乳腺等8个组织中均表达,其中在肺脏和脾脏中的表达量最高,在背最长肌和肾脏中的表达量最低。CCK-8结果表明,miR-221模拟物抑制了绵羊乳腺上皮细胞的活力(P0.05)。【结论】miR-221通过抑制靶基因IRS1的表达量,最终抑制了绵羊乳腺上皮细胞的活力和增殖数量。

摘要： 为提高牦牛乳腺上皮细胞体外培养成功率,实现高度可重复性,试验采用2.5 g/L(含0.5 g/L EDTA)胰酶和Ⅰ型胶原酶(1 mg/mL)分段消化牦牛乳腺组织块以分离细胞,原代培养时于DMEM/F12培养体系内添加氢化可的松(1μg/mL)、表皮生长因子(50 ng/mL)及胰岛素-转铁蛋白-硒(5μg/mL),传代时用牦牛乳腺上皮细胞与成纤维细胞对胰酶敏感度及贴壁时间的差异特性进行纯化。采用CCK8法测定细胞生长曲线,细胞免疫荧光技术鉴定细胞分子表型,Western blot技术对细胞进行功能鉴定。结果显示,组合酶分段消化法可获得较多细胞量,激素添加有利于促进细胞贴壁及增殖,分离纯化后的细胞具有正常生长特性,经分子表型及功能鉴定纯化后的细胞可阳性表达角蛋白18及β-酪蛋白,阴性表达角蛋白14及波形蛋白,上述3种激素存在时,细胞可在蛋白质水平表达β-酪蛋白,催乳素可促进其表达,说明成功培养了具有泌乳功能的牦牛乳腺上皮细胞,建立了有效的牦牛乳腺上皮细胞体外培养技术体系,可为以后的相关研究提供参考。

摘要： 为研究大肠杆菌(E.coli)及脂多糖(LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,以及MMPs与基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统在调控细胞外基质(ECM)代谢中的作用,分别以106 CFU/mL热灭活E.coli菌液、7.5μg/mL LPS以及E.coli菌液与LPS混合液作用于体外培养的BMECs,分别在作用细胞6、12、24、48 h后提取细胞总RNA和总蛋白,通过qPCR、Western blot检测MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、uPA、uPAR、PAI-1 mRNA转录水平和相应蛋白表达水平,并通过明胶酶谱试验检测细胞上清液中MMP-2和MMP-9蛋白活性。结果显示:E.coli菌液和LPS作用于BMECs后,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、uPA、uPAR、PAI-1 mRNA转录水平和相应蛋白表达水平均有不同程度上升。MMP-2、TIMP-1、uPA、uPAR、PAI-1 mRNA转录水平在菌液作用后显著上升,MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-2、uPAR mRNA转录水平在菌液与LPS联合作用后显著上升;MMP-9、MMP-13、TIMP-2蛋白表达水平在LPS作用后显著上升;TIMP-1、uPA、uPAR蛋白表达水平在菌液作用后显著上升;MMP-9、MMP-13、uPA、uPAR蛋白表达水平在菌液与LPS联合作用后显著上升。3个作用组MMP-2蛋白活性在不同时间均显著上升;菌液、菌液与LPS联合作用12 h时MMP-9蛋白活性显著上升。结果表明,热灭活E.coli菌液和LPS可诱导BMECs中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、uPA、uPAR和PAI-1的表达,并激活uPA系统参与调控MMPs的表达。本试验初步探究了大肠杆菌感染奶牛乳腺组织导致乳腺纤维化的发病机理,为奶牛乳腺炎和乳腺纤维化药物研究提供了依据。

摘要： [目的]本试验旨在探究肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导对小鼠乳腺上皮细胞凋亡和程序性坏死的影响。[方法]体外培养小鼠乳腺上皮细胞系(HC-11细胞)并分为4个处理组:对照(Ctrl)组、TNF-α(T)组、TNF-α+CHX(环己酰亚胺)(TC)组和TNF-α+CHX+Z-VAD-FMK(Caspase家族抑制剂)(TCZ)组。向细胞中加入TNF-α(20、50、100 ng·mL^(-1))、CHX(4μmol·L^(-1))、Z-VAD-FMK(20μmol·L^(-1)),分别处理12 h和24 h,检测细胞活力和细胞凋亡及程序性坏死相关基因和蛋白的表达,利用透射电镜观察不同处理后细胞的超微结构变化。[结果]与对照组相比,100 ng·mL^(-1) TNF-α(T-100)处理12 h后细胞活力极显著降低(P<0.001),50 ng·mL^(-1) TNF-α(T-50)和100 ng·mL^(-1) TNF-α(T-100)处理24 h后细胞活力极显著降低(P<0.01),所有TC和TCZ处理12 h和24 h后细胞活力极显著降低(P<0.001);光学显微镜下观察发现T、TC和TCZ处理后细胞呈不同程度死亡;与对照组相比,T组和TC组Bax/Bcl-2和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著上升(P<0.05);T组和TC组Caspase-8 mRNA表达水平极显著上升(P<0.01),而TCZ组Caspase-8 mRNA水平极显著降低(P<0.001),TC组和TCZ组RIP3、MLKL mRNA表达水平极显著上升(P<0.001),但只有TCZ组程序性坏死标志蛋白RIP3、MLKL和p-MLKL表达量极显著上升(P<0.01),且p-MLKL/MLKL蛋白表达比值显著上升(P<0.05);与对照组相比,TCZ组细胞内出现空泡、线粒体肿胀、断裂等坏死细胞所具有的细胞超微结构变化;TC组和TCZ组PGAM5 mRNA表达水平极显著上升(P<0.001),TCZ组PGAM5蛋白表达水平极显著上升(P<0.01),TC组和TCZ组Drp1 mRNA和蛋白表达水平均极显著上升(P<0.01)。[结论]TNF-α和TNF-α+CHX处理均可诱导小鼠乳腺上皮细胞凋亡,TNF-α+CHX+Z-VAD-FMK处理可诱导小鼠乳腺上皮细胞发生程序性坏死。

摘要： 本研究旨在探讨长链非编码RNA BCL2(lncRNA BCL2)对奶牛乳腺上皮细胞炎症及凋亡中的调控作用。利用RNAhybrid、Targetscan和miRwalk软件分析lncRNA BCL2海绵吸附的miRNAs及其所靶向的mRNAs,并对这些靶基因进行KEGG通路富集分析;采用qPCR和lncRNA超表达技术研究了lncRNA BCL2在乳腺组织和乳腺上皮细胞炎症中的表达情况及其对乳腺上皮细胞炎症和凋亡相关基因表达的影响。结果发现,与对照组相比,lncRNA BCL2在临床乳腺炎奶牛的乳腺组织和LPS诱导炎症的乳腺上皮细胞中的表达量均显著下调(P<0.05);在lncRNA BCL2超表达的情况下,乳腺上皮细胞内炎症因子IL-1β与IL-8及炎症信号通路关键基因NF-κB(p65/p50)的表达量均显著上调(P<0.05);细胞凋亡相关的CASP3和CASP9基因的表达显著下降(P<0.05),BCL2表达量显著上调(P<0.001),且BCL2与BAX比值大于2。该结果与生物信息学分析结果相符,表明lncRNA BCL2可能通过lncRNA BCL2-miRNA-BCL2-(NLRP1,CASP1,NLRP3)网络调控奶牛乳腺上皮细胞的炎症与凋亡。综上,奶牛乳腺炎过程中,lncRNA BCL2的表达量下调,减弱了其对IL-1β、IL-8和NF-κB表达上调的作用,从而可能缓解了乳腺炎症;同时,lncRNA BCL2表达量下降减弱了其下调CASP3和CASP9基因表达和上调BCL2基因表达的作用,从而可能促进了奶牛乳腺上皮细胞凋亡。

摘要： 本试验在前期试验成功建立氧化应激损伤模型的基础上,通过添加不同浓度的茶多酚,探讨茶多酚对氧化应激状态下乳腺上皮细胞抗氧化功能的影响,旨在筛选出抗氧化应激的最佳的茶多酚添加剂量.将奶牛乳腺上皮细胞(10000个/mL)接种于96孔板中,培养24h后吸弃原培养液,加入饥饿培养基饥饿16h后吸弃原培养液,加入含不同浓度(0μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL)茶多酚的DMEM/F12培养液,置37°C,5％CO2培养箱分别孵育0h、6h、8h、12h、24h.根据MTS法,检测各组细胞的增殖率.选取未对上皮细胞生长造成负面影响的茶多酚浓度范围与最佳时间.在茶多酚安全剂量范围与最佳时间确定的基础上,通过细胞培养液中脂质过氧化指标、胞内物质含量的变化以及MTS法检测的细胞增殖率筛选出茶多酚作用的适宜浓度.在确定出茶多酚作用的最佳剂量与最佳时间的基础上,通过实时PCR荧光定量与Western Blot方法探究茶多酚对氧化应激状态下乳腺上皮细胞抗氧化功能的影响.

摘要： 旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)蛋白调控硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)基因表达的影响.通过在奶牛乳腺上皮细胞中转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理因素,采用双荧光素酶报告基因系统和荧光定量PCR技术研究对SCD基因表达及启动子活性的调控作用,免疫荧光技术观察对于SREBP1在细胞核表达的影响,结果表明与转染pcDNA3.1空载体的对照组相比,SCAP组对PGL3-SCD3启动子活性无影响,SREBP1组和SCAP+SREBP1组启动子活性值显著增加(p＜0.05),并且两组之间启动子活性值相比也达到差异显著(p＜0.01);乳腺上皮细胞转染0.1ug、0.5ug和1.0ug SCAP质粒发现,SCAP的剂量与PGL3-SCD3的启动子活性具有显著的量效关系(P＜0.01);激光共聚焦观察发现在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增加SREBP1在细胞核的表达;基因表达检测发现,与对照组相比,SREBP1处理后SCD基因mRNA的表达显著上调1.23倍(P＜0.05),SCAP+SREBP1处理后SCD的表达显著上调1.54倍(P＜0.01).本研究揭示奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对靶基因SCD的转录激活作用.

摘要： 本实验旨在研究苜蓿黄酮对热应激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞的影响.将乳腺上皮细胞分成5组,每组培养基中分别含有0、2、50、75和100μg/mL苜蓿黄酮,同时置于细胞培养箱37°C,5％CO2培养72h,再在42°C恒温水浴锅中热应激1h后返回细胞培养箱培养12h,检测细胞活性、抗氧化指标和相关基因的表达.结果显示:添加25μg/mL组的细胞活性显著高于0μg/mL和50μg/mL组(P＜0.05),其他各组之间差异不显著.相对于0μg/mL组,50～100μg/mL组细胞的GSH-Px活性升高(P＜0.01),LDH和MDA含量降低(P＜0.01或P＜0.05),而CAT活性无显著性差异.相对于0μg/mL组,50μg/mL和75μg/mL组Caspase3和Socs3基因表达降低(P＜0.01),25μg/mL组P53、Stat1和Socs1基因表达升高(P＜0.01或P＜0.05),而Bcl-2和Fas基因表达无显著差异.综上所述,在热应激下,苜蓿黄酮能够提高体外培养奶牛乳腺上皮细胞的活性,改善抗氧化能力和抑制细胞凋亡,其中添加75μg/mL效果较好.

摘要： 为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺上皮如胞(BMEC)E-cadherin表达的影响.本研究分别采用金黄色葡萄球菌及热灭活的金黄色葡萄球菌菌液作用于BMEC,金黄色葡萄球菌以MOI100:1感染细胞0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h后;热灭活的金黄色葡萄球菌菌液以不同浓度(0、104、105、106、107、108cfu/mL)剌激细胞后,利用实时荧光定量PCR方法和western blot方法检测E-cadherin mRNA及其蛋白的相对表达量.结果显示,金黄色葡萄球菌在感染细胞2h之后,E-cadherin mRNA及其蛋白的表达量较未感染组显著降低(p＜0.05);不同浓度的热灭活的金黄色葡萄球菌菌液处理细胞的E-cadherin mRNA及其蛋白的表达量较对照组显著降低(p＜0.05).本研究表明,金黄色葡萄球菌及热灭活的金黄色葡萄球菌菌液能够降低奶牛乳腺上皮细胞E-cadherin mRNA及其蛋白的表达.

摘要： 本试验旨在研究苜蓿黄酮对热应激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞的影响.将乳腺上皮细胞分成5组,每组培养基中分别含有0、25、50、7和100μg/mL苜蓿黄酮,同时置于细胞培养箱37°C,5％CO2培养箱中培养72h,再在42°C恒温水浴锅中热应激1h后返回细胞培养箱培养12h,检测细胞活性、抗氧化指标和相关基因的表达.结果为:添加25μg/mL组的细胞活性显著高于0和50μg/mL组(P＜0.05),其他各组之间差异不显著.相对于0μg/mL组,50～100μg/mL组细胞的GSH-Px活性升高(P＜0.01),LDH和MDA含量降低(P＜0.01或P＜0.05),而CAT活性无显著性差异.相对于0μg/mL组,50和75μg/mL组Caspase3和Socs3基因表达降低(P＜0.01),25μg/mL组P53、Stat1和Socs1基因表达升高(P＜0.01或P＜0.05),而Bcl-2和Fas基因表达无显著差异.综上所述,在热应激下,苜蓿黄酮能够提高体外培养奶牛乳腺上皮细胞的活性,改善抗氧化能力和抑制细胞凋亡,其中添加75μg/mL效果较好.

摘要： 大多数研究表明,小RNA在细胞的增殖、分化、凋亡中有重要的作用.已有研究表明,miR-142-3p在乳腺中有表达,但在乳腺上皮细胞的调控靶点有哪些,尚不完全清楚.本研究以乳腺上皮细胞MCF-10A为实验模型,探讨miR-142-3p在乳腺上皮细胞的调控靶点及对乳腺上皮细胞的作用.应用RIP免疫共沉淀技术,筛选出miR-142-3p的靶基因,同时,应用EDU荧光标记、流式细胞术、transwell侵袭实验、免疫印迹等技术研究其如何调节乳腺上皮细胞的增殖、生长和分化过程及其对相关信号通路的作用.

摘要： 目的：探究甘氨酰tRNA合成酶(glycyl tRNA synthetase,GlyRS)通过转录延长因子4(elongation factor 4,ELP4)ELP4调控乳蛋白合成的作用机制.rn 方法：选用组织块培养法，体外培养并得到了纯化的奶牛乳腺上皮细胞，用蛋白质免疫印记(WB)和免疫荧光(IF)检测细胞中CK18和CSN2的表达以鉴定细胞的纯度和泌乳功能；用免疫共沉淀(Co-IP)技术沉淀并鉴定了细胞中ELP4与G1yRS的相互作用。rn 结果：ELP4过表达后CSN2表达显著上升；对G1yRS进行过表达和干扰，结果显示，GlyRS过表达后，ELP4的表达显著增加，CSN2的表达显著增加;G1yRS干扰后，ELP4的表达显著下降，CSN2的表达显著下降；GlyRS过表达后，细胞中p-NFκB1与ELP4的启动子序列结合显著增，GlyRS干扰后，细胞中p-NFκB1与ELP4的启动子序列结合显著降低。rn 结论：GlyRS应答氨基酸信号，通过调节ELP4调控乳蛋白合成的转录起始。

摘要： 细胞对高温的反应是机体应激反应的一部分,奶牛热应激时乳腺上皮细胞会通过细胞内外的信号,协调细胞和动物整体的代谢过程,从而对环境中的热负荷做出反应.而在奶牛泌乳过程中乳汁的合成和分泌主要是由乳腺组织的乳腺上皮细胞主导,所以阐明高温应激环境直接对乳腺自身基因表达的影响,对于深入揭示高温应激环境下奶牛产奶量下降的机制有重要意义.本研究利用牛基因组芯片分析奶牛乳腺上皮细胞在37°C正常培养和高温应激状态下基因表达水平的差异，并利用生物信息学方法筛选出在高温应激状态下特异性表达的基因。采用荧光定量PCR技术对奶牛乳腺上皮细胞中差异表达基因进行验证。利用Gene Ontology(GO)和KEEG分析对筛选出来的基因进行功能分类，并进一步分析相关通路。本实验结果可为热应激引起奶牛产奶量下降的诱因和机制提供理论支持。

摘要： 本文的目的是优化并确定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外感染牛乳腺上皮细胞的最佳感染时间.以牛乳腺上皮细胞系Mac-T细胞为材料,用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌浸染Mac-T细胞3、6、8、10h,使用RT-qPCR检测JAK2基因在不同感染时间的表达量.RT-qPCR结果显示:四个处理组的JAK2基因表达量均低于对照组,而处理组之间随攻毒时间的延长表达量呈下降趋势,且攻毒8h与10h后JAK2基因的表达量显著低于对照组(P＜0.05).依据JAK2基因表达情况,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外感染牛乳腺上皮细胞的最佳感染时间为8h.

摘要： 乳腺组织是哺乳动物重要的器官之一,其长期受到体内不同类型激素的调控,因其特殊的功能性,乳腺组织极易受到不同来源产生的ROS影响.奶牛乳腺组织发生氧化应激不仅会影响奶牛本身的机体健康,还会由于氧化产物的蓄积导致奶产品质量的降低[2].金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的重要致病菌.Contreras等通过病原分离鉴定发现奶牛乳腺炎的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌,其中金黄色葡萄球菌性乳腺炎占50％以上.因金黄色葡萄球菌的宿主逃避机制,导致其一旦侵袭奶牛乳腺组织并定居下来,机体自身将很难清除.此外,该菌极易对抗生素产生耐药性,这也为临床上治疗奶牛乳腺炎增加了极大的障碍.尽管对该病的研究可以追溯到100年前,但至今仍未找到彻底解决该病的治疗方案.

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种用于体外细胞分化的混合胶，所述混合胶由基质胶和I型鼠尾胶原按照45%：55%的体积百分比混合得到，所述I型鼠尾胶原的浓度为1.1mg/mL。将制得的混合胶与胚胎肝内胆管上皮细胞混合，可用于定向分化为成熟的肝内胆管上皮细胞和胆管结构，该方法操作简单，耗时短，成本低，且构建获得的细胞模型稳定，可用于慢性、炎性及自身免疫性等胆管疾病的治疗及机制研究。

摘要： 本公开提供了促进多能干细胞分化成胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞的方法，以及从所述方法获得的细胞，以及包含此类细胞的溶液、组合物和药物组合物。本公开还提供了将胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞用于治疗和预防疾病、产生器官以及用于其他用途的方法，以及试剂盒。

摘要： 本发明的问题在于提供一种针对干眼症等与复层扁平上皮细胞相关的疾病有效的新的治疗剂。本发明是一种包含间充质干细胞的分泌物的复层扁平上皮细胞的正常分化‑成熟促进剂。优选地，上述分泌物不含动物血清，上述间充质干细胞为来源于脂肪的间充质干细胞、来源于脐带的间充质干细胞或来源于骨髓的间充质干细胞，上述复层扁平上皮细胞为选自由角膜上皮细胞、结膜上皮细胞、表皮角化细胞、口腔上皮细胞、会厌上皮细胞、食道上皮细胞、阴道上皮细胞、声带皱襞上皮细胞、鼻腔上皮细胞以及鼻前庭上皮细胞组成的群组中的至少一种。

摘要： 本发明公开了一种纯化子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质细胞的制备方法及其应用，该制备方法通过两种不同的细胞消化液对样品依次进行消化处理得到高纯度的子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质细胞。本发明中的制备方法克服了现有的技术问题，能高效制备高纯度的完全分离的子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞以及基质细胞，而且所需的试剂仅包括消化酶，而且制备得到的细胞均为活细胞，可进一步应用于下游多种分子生物学和细胞生物学的研究。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种用于体外细胞分化的混合胶，所述混合胶由基质胶和I型鼠尾胶原按照45%：55%的体积百分比混合得到，所述I型鼠尾胶原的浓度为1.1mg/mL。将制得的混合胶与胚胎肝内胆管上皮细胞混合，可用于定向分化为成熟的肝内胆管上皮细胞和胆管结构，该方法操作简单，耗时短，成本低，且构建获得的细胞模型稳定，可用于慢性、炎性及自身免疫性等胆管疾病的治疗及机制研究。

摘要： 本发明公开了一种用于奶牛乳腺上皮细胞原代培养的奶牛乳腺组织冻存液，是由胎牛血清FBS、DMEM/F12培养基、二甲基亚砜DMSO和HEPES缓冲液复配丙酮酸钠的贮存液按体积比20：12：5：3的比例配制的；并提供了冻存液在奶牛乳腺组织冻存方法中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供的一种用于奶牛乳腺上皮细胞原代培养的奶牛乳腺组织冻存液及其在奶牛乳腺组织冻存方法中的应用，能够减少频繁取材的麻烦，降低取材成本；大大简化组织块剪切、清洗、冻存和复苏等操作过程，有利于保持组织块生物活性，可有效保存6～8个月。

摘要： 本发明公开了一种用于奶牛乳腺上皮细胞原代培养的奶牛乳腺组织冻存液，是由胎牛血清FBS、DMEM/F12培养基、二甲基亚砜DMSO和HEPES缓冲液复配丙酮酸钠的贮存液按体积比20：12：5：3的比例配制的；并提供了冻存液在奶牛乳腺组织冻存方法中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供的一种用于奶牛乳腺上皮细胞原代培养的奶牛乳腺组织冻存液及其在奶牛乳腺组织冻存方法中的应用，能够减少频繁取材的麻烦，降低取材成本；大大简化组织块剪切、清洗、冻存和复苏等操作过程，有利于保持组织块生物活性，可有效保存6～8个月。

摘要： 本发明提供了一种利用转分化乳腺上皮细胞制备转基因乳腺生物反应器的方法，包括如下步骤，1)制备携带外源基因的转分化乳腺上皮细胞；2)将步骤1)制备的携带外源基因的转分化乳腺上皮细胞注射到去除了乳腺芽的乳腺脂肪垫，注射细胞量为5×104‑1×106个细胞。本发明所述的方法有效的缩短了转基因乳腺生物反应器制备的周期，而且成本低，效率高，操作相对简单。外源基因对动物本身的影响较小，而且外源基因也不会遗传到后代，生物安全性也相对较高。

摘要： 本发明涉及应用乳腺上皮细胞制备乳腺特异性表达转基因动物的方法，该方法包括以下步骤：（1）将外源基因通过表达载体转染体外培养的乳腺上皮细胞，并应用催乳素3-8μM诱导表达；（2）筛选获得高效表达乳腺上皮细胞系；（3）高效表达细胞系进行一步或二步细胞核移植，获得乳腺特异性表达个体。本发明方法可提高转基因动物制备效率，应用该技术可以在细胞筛选阶段预测其转基因动物的表达特性，提高乳腺特异表达转基因动物制备效率3倍。由于整合的位置效应，获得的转基因个体表达几率在10-30%，并且可能出现低水平表达。应用这一技术系统可在制备转基因细胞的同时鉴定将要获得个体的表达潜能，从而获得更多的表达动物。

摘要： 本发明涉及细胞工程和转基因动物技术研究领域,特别是对乳腺细胞的采集、培养技术。应用加压冲洗的方法将清洗液、灌注液和消化液通过乳导管注入乳腺组织,经反复冲洗后获得脱落的乳腺上皮细胞,加培养液培养,回收得到的乳腺上皮细胞纯净度高、对动物损伤小,并能作若干代(8－15代)培养。特别是本发明中因活体经乳导管注入硝化液后获得细胞数量多,本发明可应用于科学研究、工厂化大量哺乳动物乳腺上皮细胞的培养、生物制药、医学细胞和基因治疗。