脂多糖

摘要： 背景:脓毒症心肌损伤与炎症反应及氧化应激损伤有关。既往研究表明川芎嗪具有抗氧化、维持钙稳态等多种功能。目的:探讨川芎嗪对脂多糖诱导的大鼠心肌细胞炎症反应及氧化应激作用的影响。方法:利用脂多糖(1μg/mL)诱导大鼠心肌细胞建立脓毒症心肌细胞炎性模型,通过不同浓度的川芎嗪(40,80,160μmol/L)干预治疗,24 h后进行检测。利用试剂盒检测川芎嗪对脂多糖诱导H9C2细胞乳酸脱氢酶以及活性氧释放的影响,荧光显微镜观察细胞凋亡情况,检测炎症因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6及Toll样受体4、MyD88的表达变化。结果与结论:(1)与对照组比较,模型组细胞中乳酸脱氢酶、活性氧表达水平显著上升(P<0.05),荧光显微镜下观察发现大量细胞被PI染色,且白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的表达水平显著升高(P<0.05);Toll样受体4、MyD88基因表达均显著上升(P<0.05);(2)与模型组比较,川芎嗪治疗组能够有效降低乳酸脱氢酶释放,降低活性氧水平,抑制PI染色H9C2细胞数目,降低白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的表达水平,抑制Toll样受体4、MyD88 mRNA及蛋白的表达(P<0.05);(3)提示川芎嗪可能通过抑制Toll样受体4/MyD88的表达降低细胞的炎症因子及氧化应激反应。

摘要： 背景:唑来膦酸可抑制骨吸收,但其是否能抑制炎症性骨疾病及其相关机制尚不完全清楚。目的:分析唑来膦酸对脂多糖诱导破骨细胞增殖、分化的影响。方法:利用脂多糖将RAW264.7细胞诱导为破骨细胞,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色鉴定诱导结果。将RAW264.7细胞分5组培养:空白对照组不进行任何干预,对照组加入脂多糖处理,其余3组在加入脂多糖的基础上分别加入0.1,1,5μmol/L的唑来膦酸处理,培养6 h后,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α水平,Western Blot检测NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β、cleaved-caspase-1及肿瘤坏死因子α的蛋白表达。培养第5天,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形成情况,F-actin染色观察破骨细胞肌动蛋白环。结果与结论:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色显示,脂多糖可诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞;②对照组肿瘤坏死因子α水平高于空白对照组(P<0.05),0.1,5μmol/L唑来膦酸组肿瘤坏死因子α水平低于对照组(P<0.05);抗酒石酸酸性磷酸酶染色与F-actin染色显示,1,5μmol/L唑来膦酸可抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞;③与对照组比较,0.1,1,5μmol/L的唑来膦酸均可抑制NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α的蛋白表达(P<0.05),1,5μmol/L的唑来膦酸均可抑制cleaved-caspase-1的蛋白表达(P<0.05);④结果表明,唑来膦酸可抑制脂多糖诱导的破骨细胞分化,该作用可能是通过调控NLRP3信号通路实现的。

摘要： 目的 基于雌激素受体α(ERα)研究丹皮酚对巨噬细胞表型转换的影响.方法 利用100μg·L-1脂多糖(LPS)和20μg·L-1γ-干扰素(IFN-γ)联用复制巨噬细胞M1极化模型.ELISA实验观察丹皮酚对白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响.进一步用Western blot检测巨噬细胞M1表型标志物一氧化氮合酶iNOS、CD86和M2表型标志物精氨酸酶-1(Arg-1)、CD163的表达,并利用阻断剂和shRNA干扰的方法验证丹皮酚的效应是否通过ERα实现.结果 ELISA结果表明丹皮酚可降低模型组TNF-α、IL-1β和MDA的含量,升高IL-10和SOD的含量.Western blot结果显示,丹皮酚可降低模型组iNOS、CD86的蛋白表达,升高Arg-1、CD163的蛋白表达.ERα选择性阻断剂MPP和ERαshRNA均能降低丹皮酚的药效,ERβ选择性阻断剂PHTPP对丹皮酚的效应没有明显改变.结论 丹皮酚可通过ERα诱导巨噬细胞向M2型转化,改善动脉粥样硬化.

摘要： 背景:作者团队前期证实糖尿病促进牙周炎的发生发展,而牙周炎是否促进糖尿病发展?目的:探索牙周炎促进糖尿病发展的分子机制.方法:体外培养小鼠胰岛素瘤βtc6细胞,分为对照组、葡萄糖组、脂多糖组、葡萄糖+脂多糖组,采用不同浓度葡萄糖(0,25,50,100 mmol/L)和脂多糖(0,10,20,40 mg/L)单独或联合刺激βtc6细胞12 h,检查每组胰岛素分泌量.另外分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(5μmol/L)和自噬激活剂雷帕霉素(10 mmol/L)对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phoshatidylinositol-3-kinase/rotein kinase B/the mammalian target of rapamycin,PI3K/AKT/mTOR)信号通路进行干预,分为雷帕霉素+脂多糖组、雷帕霉素+葡萄糖组、雷帕霉素+葡萄糖+脂多糖组及3-甲基腺嘌呤+脂多糖组、3-甲基腺嘌呤+葡萄糖组、3-甲基腺嘌呤+葡萄糖+脂多糖组.CCK-8法检测各组βtc6细胞增殖情况,活性氧荧光探针检测各组βtc6细胞中活性氧聚集量,透射电镜观察各组βtc6细胞中自噬小体生成量,Western Blot法检测自噬蛋白及相关通路蛋白表达.结果 与结论:①葡萄糖浓度超过50 mmol/L时,胰岛素分泌量不受葡萄糖调节(P>0.05);脂多糖质量浓度大于20 mg/L时,胰岛素分泌量受到抑制(P<0.05);②加入3-甲基腺嘌呤后,3-甲基腺嘌呤+葡萄糖组、3-甲基腺嘌呤+脂多糖组、3-甲基腺嘌呤+脂多糖+葡萄糖组中Becline1、p-PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达较对照组显著降低(P<0.05);p62蛋白表达则呈相反趋势(P<0.05);③加入雷帕霉素后,Becline1、p-PI3K、p-mTOR/mTOR表达较对照组显著增加(P<0.05);④提示脂多糖能诱导胰岛β细胞过度自噬下调胰岛素分泌,该机制可能与沉默PI3K/AKT/mTOR信号通路有关.

摘要： 背景:前期研究证实,脂多糖刺激小鼠MLO-Y4骨细胞上调炎症相关细胞因子白细胞介素6的表达,白细胞介素6上调破骨细胞生成相关因子核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)的表达,而PI3K/AKT信号通路是骨代谢中的重要调节通路,验证其是否参与脂多糖诱导骨细胞炎症因子的产生,对研究细菌炎症性骨吸收的机制具有重要意义.目的:验证PI3K/AKT信号通路是否参与脂多糖刺激下小鼠MLO-Y4骨细胞白细胞介素6及RANKL的表达.方法:①分别以0,100μg/L的脂多糖刺激MLO-Y4骨细胞,1,2,4,6,8 h后,采用RT-qPCR检测白细胞介素6和RANKL的mRNA表达,Western blot法检测RANKL和p-AKT蛋白表达;②取对数生长期的MLO-Y4骨细胞,分7组处理:不做任何处理(对照组)、100μg/L脂多糖、1μmol/L PI3K抑制剂+100μg/L脂多糖、2.5μmol/L PI3K抑制剂+100μg/L脂多糖、5μmol/L PI3K抑制剂+100μg/L脂多糖、10μmol/L PI3K抑制剂+100μg/L脂多糖、20μmol/L PI3K抑制剂+100μg/L脂多糖,采用RT-qPCR检测白细胞介素6和RANKL的mRNA表达;③将MLO-Y4骨细胞分4组处理:不做任何处理(对照组)、100μg/L脂多糖、二甲基亚砜+100μg/L脂多糖、10μmol/L PI3K抑制剂+100μg/L脂多糖,采用RT-qPCR检测RANKL的mRNA表达,Western blot法检测RANKL与p-AKT蛋白表达.结果 与结论:①脂多糖刺激后,骨细胞内白细胞介素6与RANKL的mRNA表达呈先升高后降低的趋势,各时间点的两基因表达量均高于无脂多糖刺激组(P<0.05);骨细胞内RANKL和p-AKT蛋白表达呈先升高后降低的趋势,各时间点的两蛋白表达量均高于无脂多糖刺激组(P<0.05);②1-10μmol/L的PI3K抑制剂呈浓度依赖性降低脂多糖诱导的骨细胞白细胞介素6和RANKL的mRNA表达量升高,浓度越高降低效果越明显,当浓度达到20μmol/L时降低效果与10μmol/L无明显差异;③二甲基亚砜与PI3K抑制剂均可降低脂多糖刺激诱导的骨细胞RANKL蛋白与mRNA表达量的升高,降低脂多糖刺激诱导的骨细胞p-AKT蛋白表达,其中以PI3K抑制剂的降低效果更明显;④结果表明,PI3K/AKT信号通路参与了脂多糖刺激小鼠MLO-Y4骨细胞白细胞介素6和RANKL的表达.

摘要： 背景:中枢神经系统疾病往往与神经元凋亡密切相关.星形胶质细胞与神经元联系紧密,来源于星形胶质细胞特别是活化星形胶质细胞的细胞外囊泡能否抑制谷氨酸所致损伤神经元的凋亡,发挥神经保护作用,尚未见报道.目的:探究星形胶质细胞胞外囊泡(astrocyte extracellular vesicles,AS-EVs)和脂多糖预处理的星形胶质细胞胞外囊泡(LPS-preconditioned astrocyte extracellular vesicles,LPAS-EVs)对谷氨酸诱导神经元损伤的作用及可能机制.方法:体外培养星形胶质细胞,并利用脂多糖预处理建立诱导活化模型,收集上清,超离法提取细胞外囊泡并进行蛋白定量和鉴定.利用PC12细胞进行初步实验,先探究AS-EVs及LPAS-EVs对PC12细胞增殖的影响,再建立谷氨酸诱导的PC12细胞和原代神经元损伤模型,实验分4组:PBS组(与EVs组同体积的PBS处理24 h)、谷氨酸组(10 mmol/L谷氨酸处理24 h)、AS-EVs组(200 mg/L AS-EVs预处理24 h+10 mmol/L谷氨酸处理24 h)、LPAS-EVs组(200 mg/L LPAS-EVs预处理24 h+10 mmol/L谷氨酸处理24 h).CCK-8法检测PC12细胞存活率,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达.结果 与结论:①成功提取星形胶质细胞并建立脂多糖诱导的星形胶质细胞活化模型;②成功提取AS-EVs及LPAS-EVs,经鉴定符合细胞外囊泡形态学标准,相关标志物表达阳性;③AS-EVs及LPAS-EVs对PC12细胞增殖无明显影响;④与谷氨酸组相比,AS-EVs和LPAS-EVs能够提高PC12细胞存活率,且LPAS-EVs作用强于AS-EVs(P均<0.05,n=3);⑤AS-EVs和LPAS-EVs能够抑制促凋亡蛋白Bax的表达,促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P均<0.01,n=3),从而抑制PC12细胞和原代神经元凋亡,发挥神经保护作用,且LPAS-EVs的作用强于AS-EVs(P均<0.05);⑥结果表明,星形胶质细胞所释放的细胞外囊泡能够抑制谷氨酸所致损伤神经元的凋亡,具有神经保护作用,并且在受到脂多糖刺激后,这种作用得到增强.

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞在组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面具有强大的应用前景,有效提升骨髓间充质干细胞移植存活率与治疗效果成为研究热点.目的:探讨芍药苷对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、迁移能力以及对脂多糖干预下骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、ERK1/2表达的影响.方法:CCK-8实验检测不同浓度芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖作用,划痕实验检测10μmol/L芍药苷对骨髓间充质干细胞迁移能力的影响,实时荧光定量PCR检测10μmol/L芍药苷干预后骨髓间充质干细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67 mRNA表达量.将骨髓间充质干细胞分为对照组、脂多糖组(1 mg/L)、脂多糖+芍药苷组(1 mg/L脂多糖+80μmol/L芍药苷),干预72 h后荧光定量PCR、蛋白免疫印迹检测细胞中转化生长因子β1、ERK1/2(MAPK3/1)基因与蛋白表达水平,免疫荧光法对骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1蛋白进行定位与半定量分析.结果 与结论:①一定浓度(6.25-12.5μmol/L)芍药苷能促进骨髓间充质干细胞增殖;②与对照组比较,10μmol/L芍药苷组空白划痕面积缩小,差异有显著性意义(P<0.05);③与对照组比较,10μmol/L芍药苷组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67 mRNA相对表达量上调,差异有显著性意义(P<0.01);④脂多糖刺激后骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、MAPK1、MAPK3 mRNA表达量与转化生长因子β1、p-ERK1/2蛋白表达量上调,差异有显著性意义(P<0.01),芍药苷与脂多糖联合干预后,上述基因与蛋白表达量降低,差异有显著性意义(P<0.01);⑤实验结果表明,芍药苷能促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖、迁移以及损伤修复相关基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67表达,下调脂多糖干预的骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、ERK1/2(MAPK3/1)基因与蛋白表达.

摘要： 背景:颅脑外伤后形成的反应性星形胶质细胞可能对神经干细胞向神经元分化产生不利影响,因此研究颅脑外伤后反应性星形胶质细胞对神经干细胞分化的调节作用及其机制对促进神经功能恢复具有很大临床应用前景.目的:探讨反应性星形胶质细胞对神经干细胞向神经元分化的影响.方法:体外培养SD大鼠星形胶质细胞,分为对照组和脂多糖刺激组,干预3 d后,采用PCR、ELISA、Western blot检测星形胶质细胞中集落刺激因子1的表达;体外培养SD大鼠原代神经干细胞,在成神经元诱导培养基中加入星形胶质细胞条件培养基共培养3 d,通过免疫荧光和流式细胞术检测β微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白的表达;体外培养原代神经干细胞,在成神经元诱导培养基中加入集落刺激因子1重组蛋白干预3 d,应用流式细胞技术和免疫荧光检测集落刺激因子1对神经干细胞向神经元分化的作用.结果 与结论:①脂多糖刺激后的星形胶质细胞及条件培养基中集落刺激因子1表达极低;②脂多糖刺激的星形胶质细胞条件培养基与神经干细胞共培养后,抑制了神经干细胞向神经元分化;③神经干细胞加入集落刺激因子1重组蛋白干预后,促进了神经干细胞向神经元分化;④结果表明,脂多糖刺激后星形胶质细胞中集落刺激因子1分泌水平下调,抑制神经干细胞向神经元分化,而集落刺激因子1过表达可促进神经干细胞向神经元分化,对大鼠脑损伤具有修复作用.

摘要： 背景:中枢神经系统疾病往往与神经元凋亡密切相关。星形胶质细胞与神经元联系紧密,来源于星形胶质细胞特别是活化星形胶质细胞的细胞外囊泡能否抑制谷氨酸所致损伤神经元的凋亡,发挥神经保护作用,尚未见报道。目的:探究星形胶质细胞胞外囊泡(astrocyte extracellular vesicles,AS-EVs)和脂多糖预处理的星形胶质细胞胞外囊泡(LPS-preconditioned astrocyte extracellular vesicles,LPAS-EVs)对谷氨酸诱导神经元损伤的作用及可能机制。方法:体外培养星形胶质细胞,并利用脂多糖预处理建立诱导活化模型,收集上清,超离法提取细胞外囊泡并进行蛋白定量和鉴定。利用PC12细胞进行初步实验,先探究AS-EVs及LPAS-EVs对PC12细胞增殖的影响,再建立谷氨酸诱导的PC12细胞和原代神经元损伤模型,实验分4组:PBS组(与EVs组同体积的PBS处理24 h)、谷氨酸组(10 mmol/L谷氨酸处理24 h)、AS-EVs组(200 mg/L AS-EVs预处理24 h+10 mmol/L谷氨酸处理24 h)、LPAS-EVs组(200 mg/L LPAS-EVs预处理24 h+10 mmol/L谷氨酸处理24 h)。CCK-8法检测PC12细胞存活率,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达。结果与结论:①成功提取星形胶质细胞并建立脂多糖诱导的星形胶质细胞活化模型;②成功提取AS-EVs及LPAS-EVs,经鉴定符合细胞外囊泡形态学标准,相关标志物表达阳性;③AS-EVs及LPAS-EVs对PC12细胞增殖无明显影响;④与谷氨酸组相比,AS-EVs和LPAS-EVs能够提高PC12细胞存活率,且LPAS-EVs作用强于AS-EVs(P均<0.05,n=3);⑤AS-EVs和LPAS-EVs能够抑制促凋亡蛋白Bax的表达,促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P均<0.01,n=3),从而抑制PC12细胞和原代神经元凋亡,发挥神经保护作用,且LPAS-EVs的作用强于AS-EVs(P均<0.05);⑥结果表明,星形胶质细胞所释放的细胞外囊泡能够抑制谷氨酸所致损伤神经元的凋亡,具有神经保护作用,并且在受到脂多糖刺激后,这种作用得到增强。

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞在组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面具有强大的应用前景,有效提升骨髓间充质干细胞移植存活率与治疗效果成为研究热点。目的:探讨芍药苷对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、迁移能力以及对脂多糖干预下骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、ERK1/2表达的影响。方法:CCK-8实验检测不同浓度芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖作用,划痕实验检测10μmol/L芍药苷对骨髓间充质干细胞迁移能力的影响,实时荧光定量PCR检测10μmol/L芍药苷干预后骨髓间充质干细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67 mRNA表达量。将骨髓间充质干细胞分为对照组、脂多糖组(1 mg/L)、脂多糖+芍药苷组(1 mg/L脂多糖+80μmol/L芍药苷),干预72 h后荧光定量PCR、蛋白免疫印迹检测细胞中转化生长因子β1、ERK1/2(MAPK3/1)基因与蛋白表达水平,免疫荧光法对骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1蛋白进行定位与半定量分析。结果与结论:①一定浓度(6.25-12.5μmol/L)芍药苷能促进骨髓间充质干细胞增殖;②与对照组比较,10μmol/L芍药苷组空白划痕面积缩小,差异有显著性意义(P<0.05);③与对照组比较,10μmol/L芍药苷组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67 mRNA相对表达量上调,差异有显著性意义(P<0.01);④脂多糖刺激后骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、MAPK1、MAPK3 mRNA表达量与转化生长因子β1、p-ERK1/2蛋白表达量上调,差异有显著性意义(P<0.01),芍药苷与脂多糖联合干预后,上述基因与蛋白表达量降低,差异有显著性意义(P<0.01);⑤实验结果表明,芍药苷能促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖、迁移以及损伤修复相关基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67表达,下调脂多糖干预的骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、ERK1/2(MAPK3/1)基因与蛋白表达。

摘要： 该试验探索了免疫应激对新西兰实验兔幼兔生长性能、内脏器官指数及血液生化方面的影响以及饲料中添加L-精氨酸对免疫应激的缓解作用,以便为养兔业的发展提供参考.选择35日龄新西兰实验兔100只,随机分成A、B、C、D四组,每组25只.试验研究L-精氨酸(Arg)对脂多糖(LPS)刺激35日龄幼兔(527.6±0.63)g生产性能、血液生化指标和内脏器官指数的影响.试验采用双因子设计,分为以下4个处理组：(A)基础日粮+生理盐水(空白对照组);(B)基础日粮+LPS(应激对照组);(C)基础日粮+LPS+0.3％Arg(0.3％Arg组);(D)基础日粮+LPS+0.6％Arg(0.6％Arg组).结果表明：LPS刺激影响了幼兔生长性能的发育以及内脏器官,免疫器官和血液生化的变化;饲料中添加0.3％或0.6％精氨酸可以缓解免疫应激对幼兔生长和内脏器官发育下降的影响.

摘要： 明确脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠肺成纤维细胞胸腺细胞分化抗原-1(thymocyte differentiation antigen,Thy-1)和整合素β3蛋白表达的调控作用,并观察其与自噬抑制的关系.将原代培养的小鼠肺成纤维细胞接种于六孔培养板,密度4*105个/ml.待小鼠肺成纤维细胞贴壁后,更换无血清培养基饥饿过夜,将其随机分为四组(n=3)：PBS对照组(Con.组)、0.25μg/ml LPS组(LPS0.25组)、0.50μg/ml LPS组(LPS0.50组)、1.00μg/mlLPS(LPS1.00组),分别加入PBS以及以上终浓度的LPS,刺激小鼠肺成纤维细胞6小时后,提取细胞总蛋白,比较不同浓度LPS刺激小鼠肺成纤维细胞6小时后Thy-1和整合素β3的蛋白表达情况.随后将小鼠肺成纤维细胞随机分为两组(n=3)：PBS对照组(Con.组)、1.00μg/ml LPS(LPS1.00组),分别加入PBS以及以上终浓度的LPS,刺激小鼠肺成纤维细胞6小时后,提取细胞总蛋白,比较不同浓度LPS刺激小鼠肺成纤维细胞30小时后自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,同时通过透射电镜观察小鼠肺成纤维细胞内自噬小体的形成情况.

摘要： 目的:探究大黄酸对脂多糖致小肠黏膜损伤的保护作用.rn 方法:SPF级SD大鼠18只,平均分成空白组(C组)、模型组(M组)和大黄酸预防组(R组),R组按66.7mg/kgbw连续3天灌胃大黄酸,C组、M组连续3天灌胃等体积生理盐水.最后一次灌胃2h后,M组和R组腹腔注射8mg/kgbw的脂多糖,C组腹腔注射等体积的生理盐水.8h后心脏采血,并取小肠组织,使用ELISA方法检测血清DAO和回肠DAO、IL-6、TNF-α的含量.rn 结果:与C组相比,M组的血清DAO水平、回肠IL-6、TNF-α水平显著升高,回肠DAO水平显著下降(P＜0.05);与M组相比,R组的血清DAO水平、回肠IL-6、TNF-α水平显著降低,回肠DAO水平显著升高(P＜0.05).rn 结论:大黄酸对脂多糖致小肠黏膜损伤具有保护作用,其机制可能是通过下调回肠内TNF-α和IL-6的水平实现的.

摘要： 目的：探讨蠲饮泄肺方对脂多糖(LPS)诱导的气道粘液高分泌的抑制作用及其机制. 方法：培养人支气管上皮16HBE细胞,根据前期结果,分别用脂多糖作用6小时、0.005％蠲饮泄肺方相应处理细胞,并对细胞进行SOCS1-siRNA转染,荧光定量PCR技术(RT-PCR)检测转染效果.根据不同的处理措施,分别为空白对照组、实验1组(仅脂多糖刺激)、实验2组(脂多糖刺激+SOCS1-siRNA转染)、实验3组(脂多糖刺激+蠲饮泄肺方)、实验4组(脂多糖刺激+SOCS1-SiRNA转染+蠲饮泄肺方).Western印迹法分别检测细胞裂解液中SOCS1、MUCSAC、磷酸化JAK1和STAT1表达量,分别以β-肌动蛋白或总JAK1和STAT1蛋白表达量为内参. 结果：RT-PCR检测SOCS1-siRNA转染效果明确.与空白对照组相比,试验1组细胞内SOCS1表达被抑制,MUC5AC、JAK1和STAT1磷酸化水平增高(P＜0.05);试验2组细胞内SOCS1表达被抑制及MUC5AC、JAK1和STAT1磷酸化水平增高更明显(P＜0.05);试验3组相比试验1组,细胞内SOCS1表达增高,MUC5AC、JAK1和STAT1磷酸化水平下降(P＜0.05);试验4组相比试验2组,细胞内SOCS1表达增高,MUCSAC、JAK1和STAT1磷酸化水平下降(P＜0.05).使用蠲饮泄肺方后能改善脂多糖和SOCS1-siRNA对细胞内SOCS1表达的抑制,降低MUC5AC、JAK1和STAT1磷酸化水平的表达. 结论：蠲饮泄肺方能通过SOCS1对JAK1/STAT1信号通路的调节作用,从而抑制脂多糖诱导的MUC5AC高表达,达到抑制黏液高分泌的作用.

摘要： 目的：研究蠲饮泄肺方对脂多糖(LPS)诱导的气道粘蛋白MUC5AC表达的调控并探讨可能的机制. 方法：体外培养人支气管上皮细胞16HBE,根据脂多糖刺激时长将细胞分为0、0.5、1、6、12及24h组,确定后续实验作用时长.用CCK8法检测不同浓度蠲饮泄肺方对16HBE细胞和LPS刺激后细胞增殖的能力,选择最适药物浓度.实验分为对照组、高粘液表达组(LPS)及蠲饮泄肺方干预组(蠲饮泄肺方+LPS),采用Western blot方法检测MUC5AC、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)蛋白的表达. 结果：脂多糖诱导MUC5AC蛋白高表达,0、0.5、1、6、12及24h组的MUC5AC的相对表达量呈增多趋势,而SOCS1蛋白则呈反向表达,6h组MUC5AC和SOCS1蛋白水平均处于中间值,故后续实验LPS的最佳作用时间选择6h.CCK-8的实验结果显示当培养基中蠲饮泄肺方溶液的浓度高时对16HBE有抑制生长的作用,当浓度为0.005％时蠲饮泄肺方溶液对LPS刺激后的细胞治疗效果最好,后续实验药物作用浓度选择0.005％,作用时间48h.LPS能刺激16HBE细胞表达MUC5AC,抑制SOCS1的表达(P＜0.05);蠲饮泄肺方能抑制LPS诱导的MUC5AC表达,促进LPS作用后SOCS1的表达(P＜0.05). 结论：蠲饮泄肺方能抑制脂多糖诱导的气道粘蛋白MUC5AC表达,作用机制可能与SOCS1有关.

摘要： 革兰氏阴性杆菌细胞壁的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是内毒素的主要成份,能诱导肺成纤维细胞异常增殖活化并分泌胶原蛋白沉积于肺组织,引起肺纤维化.自噬是存在于真核细胞中一种进化保守的,依赖于溶酶体的亚细胞降解途径.生理条件下,哺乳动物体内存在着基础水平的自噬,而在饥饿、压力、感染等刺激下,自噬可被激活,通过清除受损的细胞器,对细胞组分进行降解及回收再利用以助细胞存活.有研究表明,特发性肺纤维化患者肺组织存在低水平的自噬,而LPS刺激肺成纤维细胞可抑制细胞自噬,促进肺成纤维细胞增殖和肺纤维化进程,但其机制未明.本研究利用LPS致肺成纤维细胞增殖模型，深入探究 LPS 诱导的肺成纤维细胞自噬抑制现象及其内在机制，为进一步丰富和完善LPS致肺纤维化的发病机理、探索该病的防治手段奠定基础。

摘要： 目的:探究槲皮素对脂多糖(LPS)诱导肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的影响,并研究其分子机制.rn 方法:将大鼠微血管内皮细胞(RIMMC)随机分为5组,空白对照组、LPS造模组、高、中、低浓度槲皮素组.采用ELISA方法检测各组细胞上清液的IL-1β、IL-6和TNF-α浓度;western blot方法检测各组细胞的TLR4表达.rn 结果:槲皮素能下调LPS诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈现计量依赖性;槲皮素能下调LPS诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞中TLR4的表达.rn 结论:槲皮素有效抑制LPS诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α,TLR4通路参与槲皮素调控炎性因子的分泌.

摘要： 验证高糖对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)致人牙周膜细胞(hPDLCs)炎症的增强作用,探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7在高糖和P.gingivalis LPS致hPDLCs胞炎症中的作用,探索治疗合并有糖尿病的牙周炎可能的药物靶点.

摘要： 本实验采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导人巨噬细胞系U937细胞,构建炎症模型.应用低强度脉冲超声(Low intensity pulsed ultrasound,LIPUS)辐照处理,探讨LIPUS对炎症因子表达的调控作用及其主要机制.

摘要： 目的:观察白花丹茎叶水提物对于急性肺损伤的保护作用. 方法:90只雄性Balb/c小鼠随机均分为6组.动物麻醉后,正常组经口气管喷雾150ul/只生理盐水,其余组给药LPS建立急性肺损伤模型.动物清醒1h后,正常对照组和模型组灌胃给予生理盐水(30ml/kg),模型+高剂量、模型+中剂量、模型+低剂量组分别灌胃给予白花丹4g/kg、2g/kg、1g/kg茎叶水提物;模型+地塞米松组灌胃给予地塞米松(DXM)1mg/kg.连续给药5天后,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞数量及其分类,BCA法检测小鼠BALF中总蛋白浓度,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α,比较小鼠肺组织湿/干比值. 结果:同模型组相比:各组动物BALF总蛋白浓度均较低,差异具有显著性(P＜0.05);肺的湿干比值差异也有显著性(P＜0.05);各组小鼠BALF中TNF-a含量之间的差异无显著性. 结论:白花丹茎叶水提物对急性气道炎症具有一定的抗炎效果.

摘要： 一种将含脂细菌荚膜多糖，如脂肪多核糖基核糖醇磷酸盐、脂肪-PRP，转化为无脂，无内毒素的多糖，如多核糖基核糖醇磷酸盐PRP的方法，通过将由细菌，如流感嗜血杆菌b型的培养基中得到的含多糖粉末溶解，由多糖中离解共价结合的脂肪酸并除去脂类和内毒素。

摘要： 本发明公开了一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法，首先合成能有效干扰小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子(siRNA-224.3)及阴性对照siRNA-NC，并制备成重组慢病毒；其次，将慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7，并用嘌呤霉素筛选出阳性克隆，构建稳定细胞系siRNA-224.3、siRNA-NC；最后，应用酶联免疫吸附实验检测分别用平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖刺激条件下表达该小干扰核糖核酸分子的小鼠单核巨噬细胞稳定细胞系细胞上清中的一氧化氮、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6，通过比较其差异，实现鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖。本发明的方法相比现有技术更加方便，准确性更高。

摘要： 一种从禽多杀性巴氏杆菌提取脂多糖并制作脂多糖疫苗的方法/经过①制备禽多杀性巴氏杆菌培养液、②从禽多杀性巴氏杆菌培养液中收集禽多杀性巴氏杆菌菌体、③超声波对禽多杀性巴氏杆菌菌体进行破碎、④从超声波破碎的禽多杀性巴氏杆菌菌体中粗提脂多糖溶液、⑤从粗提的脂多糖溶液中提取脂多糖浓缩液、⑥用DNA酶和RNA酶来酶解脂多糖浓缩液中的DNA和RNA、⑦制备纯化的脂多糖和⑧将纯化的脂多糖制作成禽多杀性巴氏杆菌脂多糖疫苗共八个步骤。经动物免疫实验和动物攻毒实验，本发明制备出的禽多杀性巴氏杆菌病脂多糖疫苗给鸡进行三次免疫之后能使被免疫鸡有效地预防禽多杀性巴氏杆菌病。

摘要： 本发明公开了用于鉴定中和脂多糖的毒性的组合物的方法。所述方法包括比较在存在或不存在测试组合物的情况下由具有被脂多糖激活的Toll样受体的细胞分泌的细胞因子和/或前列腺素E2的量。还公开了使用被鉴定为中和脂多糖的毒性的组合物来中和个体的口腔中的脂多糖的毒性的方法。还公开了使用包括氧化锌和柠檬酸锌的组合的口腔护理组合物来中和个体的口腔中的脂多糖的毒性的方法。

摘要： 本发明公开了一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法，首先合成能有效干扰小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子(siRNA-224.3)及阴性对照siRNA-NC，并制备成重组慢病毒；其次，将慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7，并用嘌呤霉素筛选出阳性克隆，构建稳定细胞系siRNA-224.3、siRNA-NC；最后，应用酶联免疫吸附实验检测分别用平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖刺激条件下表达该小干扰核糖核酸分子的小鼠单核巨噬细胞稳定细胞系细胞上清中的一氧化氮、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6，通过比较其差异，实现鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖。本发明的方法相比现有技术更加方便，准确性更高。

摘要： 一种从禽多杀性巴氏杆菌提取脂多糖并制作脂多糖疫苗的方法，经过①制备禽多杀性巴氏杆菌培养液、②从禽多杀性巴氏杆菌培养液中收集禽多杀性巴氏杆菌菌体、③超声波对禽多杀性巴氏杆菌菌体进行破碎、④从超声波破碎的禽多杀性巴氏杆菌菌体中粗提脂多糖溶液、⑤从粗提的脂多糖溶液中提取脂多糖浓缩液、⑥用DNA酶和RNA酶来酶解脂多糖浓缩液中的DNA和RNA、⑦制备纯化的脂多糖和⑧将纯化的脂多糖制作成禽多杀性巴氏杆菌脂多糖疫苗共八个步骤。经动物免疫实验和动物攻毒实验，本发明制备出的禽多杀性巴氏杆菌病脂多糖疫苗给鸡进行三次免疫之后能使被免疫鸡有效地预防禽多杀性巴氏杆菌病。

摘要： 为了提供廉价地无需使用衍生自动物的组分用于培养具有被食用的经验含免疫增强剂的生物的方法，使用主要由小麦或豆腐废料组成的培养溶液来培养醋杆菌属、葡糖杆菌属、黄单胞菌属、发酵单胞菌属或肠杆菌属，所述菌属是具有免疫增强功能的可食革兰氏阴性菌。因此，醋杆菌属可以廉价且安全地获得，并且其为免疫增强剂的低分子量脂多糖也可以廉价且安全地获得。此外，不混合衍生自动物组分的杂质。

摘要： 本发明涉及一种细菌脂多糖的包被方法,包括:(a)LPS溶解于pH9.6含0.02－2%三氯乙酸的0.1mol/L碳酸盐缓冲液(包被液)中,并加到预先用杀菌紫外灯照射过的酶标测定孔中;(b)35－39°C温浴;(c)4°C放置;(d)甩干溶液,加入脱脂奶粉或白蛋白封闭液,35－39°C温浴封闭;(e)甩干溶液,洗涤液洗涤,置于4°C中保存。进一步涉及使用这种方法提供的检测细菌特定脂多糖的试剂盒及使用这种试剂盒快速检测细菌特定LPS的方法。试剂盒包括(a)细菌LPS单克隆抗体;(b)酶标二抗;(c)标准LPS;(d)稀释液;(e)已包被好LPS的酶标测定条。本发明的优点是LPS包埋方法和试剂盒简单,检测方便。

摘要： 本发明公开了一种分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，属于生物技术领域。该方法包括利用物理方法将细菌样品的菌体外膜上的脂多糖释放出来，离心分别收集第一上清液和第一沉淀；将第一上清液去除蛋白和脂质杂质后，加入沉淀剂，得到脂多糖干粉，复溶得到脂多糖溶液，利用硫酸‑苯酚法定量脂多糖；将第一沉淀用清洗液洗涤后加入表面活性剂处理，离心收集第二上清液；将第二上清液去除蛋白和脂质杂质后，加入沉淀剂，得到荚膜多糖干粉；将荚膜多糖干粉加入低浓度盐酸复溶，室温孵育后，得到荚膜多糖溶液，利用糖醛酸内酯测定法定量荚膜多糖。该方法实现在不裂解细菌菌体的情况下同时分离并定量脂多糖和荚膜多糖，提高了纯度和准确度。

摘要： 本发明涉及一种由霍乱弧菌O139的脂多糖(LPS)的多糖部分(O－特异性多糖+核心)(pmLPS)制成的缀合物，其通过用己二酸二酰肼对pmLPS衍生化，并通过碳二亚胺介导的缩合与破伤风类毒素(TT)偶联而制备。所述缀合物激发高水平的IgG抗体，该抗体在第一次接种3个月后达到高峰，并在随后的5个月内缓慢降低。TT单独或作为缀合物的一种成分主要诱导IgG抗体。由该缀合物激发的抗体识别来自霍乱弧菌O139的荚膜多糖(CP)和LPS，而且是杀弧菌的。它们在霍乱感染的新生小鼠模型中也有保护性。O139 pmLPS的缀合因此增强其免疫原性并赋予此多糖T细胞依赖性质。