合成肽

摘要： 通过软件预测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的主要抗原性表位,利用化学合成的方法合成三条针对N蛋白抗原表位的多肽作为包被抗原,筛选最优的一条建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该ELISA方法的最适条件为:以2.5μg/mL的合成肽(Pep3)包被酶标板,4°C过夜,不需封闭,阴阳性血清分别稀释200倍,37°C作用60 min,辣根过氧化酶(HRP)标记兔抗猪酶标二抗1000倍稀释,37°C作用30 min,TMB 37°C显色15 min,2 mol/L H2SO4终止反应,酶标仪A(450 nm)读数。利用所建立的方法测定50份阴性血清的值计算S/P值,求得当S/P值≥0.324时,即为阳性,0.324>样品S/P值>0.212即为可疑,S/P值≤0.212时,即为阴性。之后进行了灵敏度试验,将标准阳性血清进行1∶3200倍稀释仍然呈现阳性,说明该检测方法具有较高的灵敏性;与常见的PCV2、CSFV、PRV、SIV 4种猪疫病阳性血清无交叉反应,说明该检测方法具有较高的特异性;通过对临床的200份样品进行检测,与IDEXX-PRRSV抗体检测试剂盒相比较,符合率达91.4%,说明该校测方法具有较高的符合率。本研究建立的ELISA方法对于PRRSV的常规诊断及流行病学调查具有重要意义。

摘要： 目的 探讨化学合成肽修饰钛种植体表面的抗菌效果.方法 利用源于人类β防御素3(hBD3)的一个片段(hBD3-1)与肽TBP-1化学结合,形成合成肽TBP-1-hBD3-1.Peptide Calculator软件分析合成肽的基本性质;标准微量肉汤稀释法检测TBP-1-hBD3-1对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC),微量滴定法检测生物膜对照组和生物膜实验组光密度(OD600)值差异;共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)检测TBP-1-hBD3-1修饰在钛种植体表面的黏附、活性情况.结果 TBP-1-hBD3-1具有较好的溶解性及亲水性,并有疏水性基团,带有一定的正电荷数(4+).TBP-1-hBD3-1对P.gingivalis的MIC值和MBC值分别为400 mg/L和1000 mg/L.生物膜实验组较生物膜对照组OD600值降低(P<0.05).CLSM结果表明,被AMC标记成蓝色的TBP-1-hBD3-1能够牢固地黏附于钛样本表面.结论 合成肽TBP-1-hBD3-1能够修饰在钛样本表面并发挥抗菌和抑制细菌生物膜形成的作用.

摘要： 本试验根据猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白表位,结合文献报道及软件预测,设计合成肽抗原;再用PCV2阳性血清进行筛选,优选出4条肽的混合肽段作为包被抗原;继而通过最适条件摸索,建立PCV2合成肽间接ELISA抗体检测方法,并从该方法的敏感性、特异性、重复性及其他试剂盒进行比对试验等关键性指标进行评估。结果显示,间接ELISA的敏感性为95.0%,特异性为97.5%,批内变异系数在3.4%~7.2%,批间重复性变异系数在4.8%~8.6%。比对试验结果显示,本间接ELISA与PCV2 Cap蛋白包被试剂盒符合率为91.5%;与猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒(锐捷)符合率为94.6%。因此,本试验建立的猪圆环合成肽间接ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强和重复性好,可用于临床PCV2血清抗体检测及作为疫苗免疫效果评价的技术手段。

摘要： 马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)糖蛋白C(glycoprotein C,gC)是参与MDV水平传播的重要毒力因子,但其具体作用机制尚未明确.研究gC蛋白所需的抗体在国内未见报道,为简化抗体制备程序,本研究采用合成抗原肽免疫的策略,通过生物信息学软件分析发现gC蛋白的优势抗原表位主要集中在其69～85氨基酸区段,据此合成肽段N-NSESTNEH-TITETTGKN-C作为抗原免疫日本大耳白兔.在有弗氏佐剂条件下,5次免疫后采集抗血清,斑点印迹试验显示制备的抗gC多克隆抗体与合成肽的反应效价为1:10000;经亲和层析柱纯化后的gC抗体具有良好的反应特异性,对转染或MDV感染的细胞中运用免疫荧光试验和免疫印迹技术均能检测到特异的阳性信号.与疫苗毒相比,广西野毒分离株gC蛋白的免疫荧光信号更强.本研究获得的MDV的gC多克隆抗体可用于后续对gC蛋白功能的研究.

摘要： Objective: To predict the antigenic epitopes of the ZNF185 gene and investigate the immune response and immune contraceptive effect induced by corresponding synthetic peptides. Methods: The secondary structure, hydrophilicity, plasticity, surface probability and antigen index of ZNF185 protein were predicted by DNA S tar software. The synthetic polypeptide carrying antigenic epitopesof ZNF185 was used to vaccinate mice, and thenthe IgG antibody levels in mouse serum, mating rate, fertility rate and mean litter size were examined. In addition, pathologic change of the reproductive organs was observed. Results: Two amino acid sequences of ZNF185 were screened to synthesize polypeptide, the polypeptide could induce mice to produce higher antibody levels. Furthermore, the rate of mating and fertility was significantly lower in the experimental group than in the control group, and no show significant histopathological changes was observed in reproductive organs. Conclusion: ZNF185 has a certain anti-fertility effect.%目的:预测ZNF185基因的抗原表位, 并研究相应合成多肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应.方法:应用DNA Star软件预测ZNF185蛋白二级结构、亲水性、可塑性、表面可及性与抗原指数.合成携带ZNF185抗原表位的多肽, 进行小鼠免疫实验, 检测小鼠血清中IgG抗体水平、交配率、妊娠率及每窝产仔数, 并观察生殖器官是否发生病变.结果:筛选ZNF185两段氨基酸序列合成多肽, 该多肽能够诱导小鼠产生较高的抗体水平, 实验组小鼠交配率和妊娠率显著低于对照组, 生殖器官并无发生明显的组织病理学变化.结论:ZNF185具有一定的抗生育作用.

摘要： 目前使用的流感疫苗都是针对现行流行株设计的,因此难以有效应对病毒快速变异出现的新病毒株,而开发能同时抵抗多个流感病毒株感染具有交叉保护作用的通用疫苗是今后流感疫苗研发的趋势.本研究对近年来基于流感病毒血凝素构建的通用流感疫苗作一综述.

摘要： [目的]本试验旨在制备抗鼠伤寒沙门菌Pag C蛋白的单克隆抗体并初步分析其特异性和识别的抗原表位,为沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的建立奠定基础。[方法]原核表达并纯化Pag C蛋白,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体;用生物信息学分析法获得Pag C蛋白在沙门菌属内保守的区段,合成相应多肽P1及P2用于单克隆抗体筛选和结合表位鉴定;最后采用免疫印迹方法对单克隆抗体与肠杆菌科其他细菌的交叉反应进行检测,评价其特异性。[结果]纯化后的Pag C蛋白相对分子质量约23×103;免疫小鼠后经2次亚克隆最终得到稳定分泌抗体的细胞株6株,标记为A、B、C、D、I、J;单克隆抗体的反应性试验结果显示6株单克隆抗体均能够识别Pag C蛋白;单克隆抗体的结合表位分析显示,J细胞株分泌的单克隆抗体可特异性识别P1序列;采用免疫印迹方法对J细胞株上清液进行特异性检测,证实该株单克隆抗体与变形杆菌、大肠杆菌O1和宋内志贺菌Pag C蛋白均无结合反应。[结论]成功获得1株与Pag C蛋白有良好结合活性且具有高度特异性的单克隆抗体,该株单克隆抗体的识别表位位于Pag C中沙门菌属内保守区段,可作为建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的候选单克隆抗体。

摘要： 根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证.结果显示,该方法敏感性为96.7％,特异性为99.1％,批内和批间变异系数分别为2.1％～9.8％和3.5％～10.7％.与2种商品化试剂盒比较,符合率分别为93.5％和85.9％.结果表明,该方法敏感性好、特异性强、稳定性高,可用于牛口蹄疫O型抗体水平检测.

摘要： 根据猪口蹄疫O型流行毒株VP1序列设计出5条合成肽,以固相法合成并以此合成肽作为包被抗原建立猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性、重复性等进行验证.结果表明:该检测方法敏感性为96.0％,特异性为99.1％,批内与批间重复试验变异系数小于10.0％.比对试验结果显示,该检测方法与UBI猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒符合率为93.2％,与中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒符合率为85.7％.该猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强、稳定性高、操作简便,可用于检测O型口蹄疫抗体水平.

摘要： 肽是介于氨基酸与蛋白质之间的一种生化物质。由两个以上甚至多达几十个氨基酸以肽键相连聚合成肽，再由多个肽以侧链相接聚合成蛋白质。自然界中的肽主要以小肽、寡肽和多肽的形式存在，其中小肽是指由2~4个氨基酸构成的高活性肽，其分子量一般为180-480D a。在养猪生产中，仔猪断奶后往往出现饲料采食量低、消化不良、生长滞缓、疾病易感性高等问题。断奶应激被认为是养猪生产中面临的最大挑战。鱼分离肽（商品名：海之贝）是用深海鱼为原料，通过深度酶解，并经多次质膜过滤生产的鱼蛋白分离肽，其小肽含量非常高。因此，一方面可以为仔猪提供快速吸收的营养素；另一方面，其中的活性功能肽对于促进肠道发育、增强免疫功能、促进动物生长具有重要作用，而且鱼分离肽中含有丰富的UMAMI成分，对于改善饲料的适口性，增加仔猪的采食量具有重要帮助。

摘要： 由于其活性好、毒性低的特点,肽类药物的市场日益壮大.大多数肽都通过固相合成方法生产得到,该方法很容易引入工艺杂质,例如脱保护不完全的肽和副反应产物等等.此外,与产物相关的杂质(例如氧化和脱酰胺化产物)也增加了药物杂质分析的复杂程度.为确保产品的有效性和安全性,国际协调会议(ICH)指南要求对其中的杂质进行鉴定4,而LC-UV检测技术是杂质检测中常用的手段.然而,光学检测只能用于已知或经过表征的样品,而这通常需要分析人员进行繁琐的分馏和富集处理,然后再应用MS技术进行分析鉴定.随着肽类治疗药物不断发展,需要更加高效的工作流程,从而在保证产品质量的前提下加快产品上市速度.结合了正交检测方法(例如质谱(MS))的技术能够解决合成肽生产过程中的杂质分析难题.当需要将MS检测技术引入基于LC-UV的工作流程时,ACQUITY QDa质谱检测器是一种经济高效的解决方案5.实验证明,ProMass(Novatia,LLC)软件与MassLynx配合使用,能够对ACQUITY QDa质谱检测器生成的MS数据进行自动处理,从而实现高通量的合成肽筛查分析6.本文介绍了一种经济有效的LC-UV-MS工作流程,该工作流程将ACQUITY QDa质谱检测器引入分析工作中,并将ProMass与MassLynx软件相结合,用于合成肽的质量确认和杂质监测.为了展示该工作流程,本研究分析了一种临床相关合成肽样品-依来多辛.

摘要： 人工合成口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC上的主要抗原表位肽，并将其与载体蛋白OVA偶联，作为包被抗原，制备检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的ELISA试荆盒，并对该试荆盒的特异性、灵敏性及符合率进行了初步研究。结果表明该方法的敏感性为86.7%，特异性为100%。与上海优耐特公司生产的FMDVNS EIA Kit试剂盒同步检测120份临床血清样本，两者的总符合率达到90%。该合成肽ELISA试剂盒有较好的检测性能，可以用于口蹄疫病毒感染猪和疫苗免疫猪的鉴别诊断。

摘要： 目的:人心肌肌钙蛋白I(cardiac troporlin I, cTnI)合成肽及其抗体的研制,为以国产试剂替代进口试剂奠定基础。rn 方法:根据cTnI氨基酸序列,结合计算机软件分析,预测cTnI分子的亲水性、抗原性和同源性,采用固相多肽合成法合成了cTnI分子98-110位氨基酸肽段序列(RQLHARVDKVDEE),经与载体蛋白KLH偶联作为免疫原。免疫家兔制备相应抗体。rn 结果:实验结果表明,采用多肽合成法合成的cTnI合成多肽(13肽),其纯度达到95％;免疫学实验证实。该肽段具有较强的免疫原性,用此多肽与KLH的连接物作为免疫原制备的抗体,其效价达到1:20万;该抗体与从心肌组织中提取的cTnI也具有较好的交叉反应性;用scatcHard作图法,求得其亲和常数Ka=0.98×1 0L/mol;与cTnT、CK-MB均无交叉反应。rn 结论:cTnI合成肽及其相应抗体的研制为cTnI检测试剂的国产化奠定了基础。

摘要： 到目前为止,国际上将戊型肝炎病毒(HEV)分为8个基因型,并有明确的区域性.Ⅰ型分布于亚洲和非洲;Ⅱ型分布于墨西哥;Ⅲ型分布于美国;Ⅳ型主要分布于中国大陆和台湾;Ⅴ～Ⅷ型主要分布于欧洲.Ⅰ～Ⅳ型之间全基因核苷酸序列同源性为74﹪～76﹪.国内外均有对HEV ORF2 N-端的抗原位点的抗原性的报道,本文就HEVⅣ型ORF2 N-端的氨基酸顺序为25-38(PSGRRGRRSGGSG)表位化学合成肽(SP14)的抗原性作一初步观察研究.

摘要： 本文介绍了2010年艾滋病检测实验室网络建设情况，实验通过用510份血浆样品检测了HIV-2抗体的能力，并对HIV早期感染的检测性能进行了评价，实验得出结论：对于常规临床样品，万泰RIBA敏感性高、特异性高。与MP-WB相比，可以减少非特异性不确定结果的产生；对于HIV阳转样品，与MP-WB相比，万泰RIBA和INNO-LIA可以缩短HIV抗体确证的窗口期，被少特异性不确定结果的产生；基于重组蛋白和(或)合成肽的新一代证试剂有望成为今后我国HIV抗体确证试加的发展方内。

摘要： 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)，是人类先天性病毒感染的最常见病原体之一，可引起多种不同的感染综合征，在免疫功能受损者中可引起严重的感染，甚或致死。既往HCMV感染的血清学检测多采用以组织培养的病毒裂解物作抗原，但由于其抗原成分复杂:存在潜在细胞蛋白的污染、与其它疤疹病毒存在交叉反应。本文以固相多肤合成技术合成了7段抗原性肤段，并选择高反应性和特异性的肤段为抗原，井对其进行了方法学评价。

摘要： 本文依据人巨细胞病毒PP150氨基酸序列,利用计算机辅助设计决定含HCMVPP150较强的抗原决定簇多肽序列,合成肽作抗原建立检测抗HCMV-IgM的酶联免疫吸附试验(ELISA)。研究结论:所建立的以合成多肽作抗原检测巨细胞病毒酶联免疫方法具有较好的特异性、简便、快速、适用于临床标本的检测。

摘要： 本文研究了原卟啉Ⅸ促进胰岛素从单体、二聚体自组装成六聚体的作用，原卟啉Ⅸ与胰岛素结合也促进胰岛素单体、二聚体在碱性条件下自组装形成稳定的六聚体，原卟啉Ⅸ可能是一种促进胰岛素变构并自组装的新配体.

摘要： 本文研究了原卟啉Ⅸ促进胰岛素从单体、二聚体自组装成六聚体的作用，原卟啉Ⅸ与胰岛素结合也促进胰岛素单体、二聚体在碱性条件下自组装形成稳定的六聚体，原卟啉Ⅸ可能是一种促进胰岛素变构并自组装的新配体.

摘要： 本文研究了原卟啉Ⅸ促进胰岛素从单体、二聚体自组装成六聚体的作用，原卟啉Ⅸ与胰岛素结合也促进胰岛素单体、二聚体在碱性条件下自组装形成稳定的六聚体，原卟啉Ⅸ可能是一种促进胰岛素变构并自组装的新配体.

摘要： 本发明公开了固相合成胸腺肽α1的20肽阶段的缺失肽、非肽杂质及检测方法，包括：将固相合成胸腺肽α1的20肽采用LC/MS联用仪进行梯度洗脱获取离子流谱；如果所获取的离子流谱在16.69min、17.78min、18.47min、19.54min、23.18min或24.65min分别出现峰面积为2.27％、1.65％、2.18％、5.79％、7.57％或2.39％的离子流峰，说明20肽含有缺失肽；如果在15.11min或16.12min时出现峰面积为1.46％或2.18％的离子流峰，说明20肽含有非肽杂质。本发明可有效保障和控制固相合成胸腺肽α1中20肽阶段的质量。

摘要： 本发明公开了固相合成胸腺肽α1的11肽阶段的缺失肽、非肽杂质及检测方法。所述检测方法包括：将固相合成胸腺肽α1的11肽阶段样品采用LC/MS联用仪进行梯度洗脱获取离子流谱；如果所获取的离子流谱在4.44min时出现峰面积为9.46％的峰或在14.86min时出现峰面积分别为8.19％的峰、则说明固相合成胸腺肽α1的11肽阶段中含有缺失肽；如果所获取的离子流谱在22.64minmin时出现峰面积为0.91％的峰，则说明固相合成胸腺肽α1的11肽阶段中含有非肽杂质。本发明可准确、灵敏的鉴别出固相合成胸腺肽α1的11肽阶段是否含有缺失肽或非肽杂质，可有效保障和控制胸腺肽α1的质量或纯度。

摘要： 本发明公开了一种人工合成小分子肽、含有该人工合成小分子肽的生长调节剂及其应用方法，所述小分子肽的氨基酸序列如Seq ID No.1所示。所述生长调节剂为用于促进植物吸收矿质元素的生长调节剂。所述矿质元素包括Mg、Ca、Mn、Fe、Zn、Cu或B中的至少一种。所述应用方法包括以下步骤：将所述人工合成小分子肽配制成溶液施加到植物的根部或叶片上。本发明方案的小分子肽结构简单，易被植物吸收利用，其不仅可以被植物的根部吸收利用，还可以在被叶片吸收后向根部传递信号从而引起根中微量元素的变化；该肽仅需微量添加即可对多种矿质元素的吸收过程起到显著的促进作用，同时，该多肽还对植物生长具有一定的促进作用。

摘要： 本发明公开了固相合成胸腺肽α1的20肽阶段的缺失肽、非肽杂质及检测方法，包括：将固相合成胸腺肽α1的20肽采用LC/MS联用仪进行梯度洗脱获取离子流谱；如果所获取的离子流谱在16.69min、17.78min、18.47min、19.54min、23.18min或24.65min分别出现峰面积为2.27％、1.65％、2.18％、5.79％、7.57％或2.39％的离子流峰，说明20肽含有缺失肽；如果在15.11min或16.12min时出现峰面积为1.46％或2.18％的离子流峰，说明20肽含有非肽杂质。本发明可有效保障和控制固相合成胸腺肽α1中20肽阶段的质量。

摘要： 本发明公开了固相合成胸腺肽α1的11肽阶段的缺失肽、非肽杂质及检测方法。所述检测方法包括：将固相合成胸腺肽α1的11肽阶段样品采用LC/MS联用仪进行梯度洗脱获取离子流谱；如果所获取的离子流谱在4.44min时出现峰面积为9.46％的峰或在14.86min时出现峰面积分别为8.19％的峰、则说明固相合成胸腺肽α1的11肽阶段中含有缺失肽；如果所获取的离子流谱在22.64minmin时出现峰面积为0.91％的峰，则说明固相合成胸腺肽α1的11肽阶段中含有非肽杂质。本发明可准确、灵敏的鉴别出固相合成胸腺肽α1的11肽阶段是否含有缺失肽或非肽杂质，可有效保障和控制胸腺肽α1的质量或纯度。

摘要： 本发明涉及小分子肽制备技术领域，具体公开了一种用于γ‑D谷氨酰肽合成的酶及γ‑D谷氨酰肽的合成方法。所述的用于γ‑D谷氨酰肽合成的酶，其特征在于，通过如下方法制备得到，(1)将枯草芽孢杆菌中的谷氨酰胺酶基因片段转录到大肠杆菌中，然后将大肠杆菌接种到发酵培养基中培养，取发酵液经离心、过滤后取上清液得粗酶液；(2)在水中加入谷氨酰胺，然后调节pH值至碱性，再加入粗酶液，进行反应即得所述的用于γ‑D谷氨酰肽合成的酶。本发明所述的用于γ‑D谷氨酰肽合成的酶用于γ‑D谷氨酰肽的合成过程中可以杜绝副产物的生成以及提高γ‑D谷氨酰肽的合成产率，为γ‑D谷氨酰肽的大规模工业化生产提供了一种新的方法。

摘要： 本发明公开了一种成骨合成肽，其源自骨形态发生蛋白-7，并由15个氨基酸残基的序列构成(BFP-1)。本发明还提供了含有所述成骨合成肽的药物组合物及培养基组合物。由于在促进成骨细胞的分化方面具有显著活性，所述成骨合成肽在骨质疏松症、骨缺损疾病及/或骨关节炎的治疗方面非常有用。

摘要： 本揭示内容是关于一种生物分子，该生物分子包含一用以标的血栓的合成肽，一种包含该生物分子的药学组合物，以及其在治疗与栓塞相关的疾病中的用途。依据本揭示内容的实施方式，该合成肽具有SEQ ID NO:1、2或3的氨基酸序列，且该合成肽会展现出对血栓的结合亲和力及专一性。因此，该合成肽可作为一种标的元件，用以递送一治疗剂(例如，一抗凝血剂或一溶血栓剂)至血栓处，据以改善该治疗剂的治疗安全性及疗效。

摘要： 本发明公开了一种成骨合成肽，其源自骨形态发生蛋白-7，并由15个氨基酸残基的序列构成(BFP-1)。本发明还提供了含有所述成骨合成肽的药物组合物及培养基组合物。由于在促进成骨细胞的分化方面具有显著活性，所述成骨合成肽在骨质疏松症、骨缺损疾病及/或骨关节炎的治疗方面非常有用。

摘要： 本揭示内容是关于一种生物分子，该生物分子包含一用以标的血栓的合成肽，一种包含该生物分子的药学组合物，以及其在治疗与栓塞相关的疾病中的用途。依据本揭示内容的实施方式，该合成肽具有SEQ ID NO:1、2或3的氨基酸序列，且该合成肽会展现出对血栓的结合亲和力及专一性。因此，该合成肽可作为一种标的元件，用以递送一治疗剂(例如，一抗凝血剂或一溶血栓剂)至血栓处，据以改善该治疗剂的治疗安全性及疗效。