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产毒素多杀性巴氏杆菌菌落双重PCR检测方法的建立

         

摘要

为建立快速特异的PCR方法以及同时检测并区分产毒素与非产毒素多杀性巴氏杆菌,本研究根据GenBank登录的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和toxA毒素基因序列,设计合成了2对特异引物.特异性试验表明产毒素多杀性巴氏杆菌C51-6扩增出了460 bp和1 854 bp的2条目的片段,而不产毒素多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌和鸡白痢沙门菌的扩增均为阴性;敏感性试验表明该PCR方法能从含450 CFU的菌液中扩增出相应的目的片段.同时用豚鼠皮肤坏死试验和小鼠致死试验对该PCR方法进行了验证.

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