IBDV血清Ⅱ型VP5蛋白原核表达及型特异性单克隆抗体的制备

秦立廷; 祁小乐; 高宏雷; 高玉龙; 王笑梅

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本实验构建表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清Ⅱ型23/82株VP5蛋白,并制备出能够区分不同血清型IBDV的单克隆抗体(mAb).利用EcoR I和Xho I双酶切pUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株IBDV VP5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET-23/82VP5,转化到宿主茵BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白,SDS-PAGE分析表明该融合蛋白分子量大小约为23 ku.Ni-NTA柱纯化重组蛋白,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,常规方法进行细胞融合,获得1株阳性杂交瘤细胞株(5D3),IFA和western blot分析表明该细胞株分泌的mAb仅与血清II型IBDV 23/82株VP5反应,不与血清I型IBDV Gt株VP5反应.腹水抗体间接ELISA效价为1×104.该mAb的制备为研究血清II型IBDV的VP5的功能和标记疫苗的研制奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2009年第4期|292-295|共4页
作者
秦立廷; 祁小乐; 高宏雷; 高玉龙; 王笑梅;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

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正文语种 chi
中图分类 S852.659;
关键词
传染性法氏囊病病毒; VP5; 原核表达; 单克隆抗体;

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