首页> 中文期刊> 《中国预防兽医学报》 >EIAV基因转移载体的优化

EIAV基因转移载体的优化

         

摘要

本研究在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移栽体pcPPTPRE(+)的基础上[含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)和人乙型肝炎病毒转录后调控元件(HPRE)],对其转录后调控元件和外源基因启动子进行优化.参考土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)基因组序列和人巨细胞病毒增强子/鸡β-actin启动子序列(CAGp),设计合成2对引物,分别扩增WHV转录后调控元件(WPIE)和CAGp片段,正向插入pcPPTPRE(+)获得重组质粒pcPPTWPRE和pcPPTWCAG.将获得的EIAV转移栽体pcPPTWPRE和pcPPTWCAG以及pcPPTPRE(+),脂质体法分别转染人胚肾细胞HEK293和鸡胚成纤维细胞系DF-1,转染后12 h、24 h、36 h、48 h在荧光显微镜下观察特异性绿色荧光的表达.48 h后收获细胞,利用流式细胞仪检测转染细胞中表达EGFP的阳性细胞.结果表明,在HEK293细胞中pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均极显著高于pcPPTPRE(+)(P<0.01),pcPPTWCAG显著高于pcPPTWPRE(P<0.05);pcPPTWCAG的平均道数值极显著高于pcPPTPRE(+)和pcPPTWPRE,pcPPTWPRE显著高于pcPPTPRE(+).在DF-1细胞中pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均显著高于pcPPTPRE(+),而pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的平均道数值均极显著高于pcPPTPRE(+).pcPPTWCAG显著高于pcPPTWPRE.本研究利用WPRE和CAGp优化构建了EIAV基因转移载体pcPPTWCAG,获得了较强的基因表达能力,为以鸡为宿主进行转基因研究提供了条件.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2008年第3期|183-189|共7页
  • 作者单位

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    新疆农业大学动物医学学院,新疆,乌鲁木齐,830052;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    新疆农业大学动物医学学院,新疆,乌鲁木齐,830052;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 S852.659.3;
  • 关键词

    马传染性贫血病毒; CAG启动子; WPRE; 基因转移载体; 绿色荧光蛋白;

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号