SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测犬瘟热病毒方法的建立及应用

黄国君; 岳华; 杨发龙; 兰道亮; 汤承; 卢建远

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根据GenBank发表的犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(NP)基因序列,设计合成一对引物,建立了基于SYBR Green Ⅰ Real-time RT-PCR检测CDV核酸.以含有83 bp扩增产物的pGM-T载体质粒为参考,构建了标准曲线.对该方法的特异性、敏感性、可重复性进行了评价,与常规RT-PCR及胶体金免疫检测技术(GIA)进行了敏感性比较.结果表明,该方法能特异性检测到CDV的扩增信号;检测范围在5.2×102～5.2×108拷贝之间有良好的线性关系,相关系数为0.999,扩增效率为96.80%;敏感度高,最低检测限为52拷贝,比常规RT-PCR高103倍,比GIA高105倍;组内变异系数为0.51%～1.90%,组间变异系数为1.96%～2.63%.用建立的Real-time RT-PCR检测11例临床病例.CDV阳性率为100%.对犬瘟热弱毒活疫苗中的CDV进行定量,其含量在1.24 X105～4.88 X 105拷贝/头份之间.该方法的建立为CDV的早期快速诊断、分子流行病学调查及疫苗质量监测等提供了一种新的快速定量检测手段.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2008年第6期|450-454|共5页
作者
黄国君; 岳华; 杨发龙; 兰道亮; 汤承; 卢建远;
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作者单位

西南民族大学生命科学与技术学院,四川,成都,610041;

西南民族大学生命科学与技术学院,四川,成都,610041;

西南民族大学生命科学与技术学院,四川,成都,610041;

西南民族大学生命科学与技术学院,四川,成都,610041;

西南民族大学生命科学与技术学院,四川,成都,610041;

西南民族大学生命科学与技术学院,四川,成都,610041;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
犬瘟热病毒; SYBR Green Ⅰ; 荧光定量RT-PCR;

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