猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR方法及多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法的建立

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略表

声明

第一章绪论

1.1相关病原简介

1.1.1猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)

1.1.2猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2，PCV-2)

1.1.3猪伪狂犬病病毒(Poreine pseudorabies virus，PRV)

1.2相关病原的诊断技术

1.2.1病毒分离鉴定

1.2.2血清学和免疫学方法

1.2.3分子生物学诊断技术

1.3.1实时荧光定量PCR方法的原理

1.3.2实时荧光定量PCR方法的分类

1.3.3多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法

1.3.4实时荧光定量PCR在生命科学研究中的应用前景

1.4本研究的目的和意义

2.1实验材料

2.1.1毒株与细胞

2.1.2载体与菌种

2.1.3生化试剂及试剂盒

2.1.4主要仪器

2.2实验方法

2.2.1病毒培养

2.2.2PRRSV N蛋白基因、PCV-2 rep蛋白基因和PRV gE基因的部分核酸序列的克隆与鉴定

2.2.3SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR标准品的制备及标准曲线的制作

2.2.4 3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR特异性试验

2.2.5 3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR重复性试验

2.3结果

2.3.1 3种病毒特异性引物

2.3.2 PRRSV N蛋白基因、PCV-2 rep蛋白基因和PRV gE基因的部分核酸序列PCR扩增电泳鉴定结果

2.3.3 PRRSV N蛋白基因、PCV-2 rep蛋白基因和PRV gE基因的部分核酸重组质粒PCR鉴定结果

2.3.4 PRRSV N蛋白基因、PCV-2 rep蛋白基因和PRV gE基因的部分核酸序列重组质粒测序结果

2.3.5 3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR标准曲线

2.3.6 3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR特异性试验结果

2.3.7 3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR重复性试验结果

2.4讨论

3.1实验材料

3.1.1毒株

3.1.2生化试剂及试剂盒

3.1.3主要仪器

3.2实验方法

3.2.1病毒培养

3.2.2引物

3.2.3 PCV、PIV病毒DNA的提取

3.2.4 PRRSV病毒cDNA的制备

3.2.5多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR反应条件

3.2.6特异性试验

3.2.7重复性试验

3.2.8敏感性试验

3.3结果

3.3.13种病毒扩增片段TM值的确定

3.3.2特异性试验结果

3.3.3重复性试验结果

3.3.4敏感性实验结果

3.4讨论

第四章 全文结论

参考文献

致 谢

作者简历