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猪细环病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

摘要

猪细环病毒(Porcine Torque teno sus virus PTTSuV)属于细环病毒科细环病毒属,为建立检测猪细环病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,本研究根据猪细环病毒(Porcine Torque teno sus virus k2,PTTSuV)ORF2基因序列特征设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测猪细环病毒的实时荧光定量PCR方法,该方法检测猪细环病毒ORF2基因含量在1.82×102-1.82×107拷贝/μL反应范围内有很好的线性关系.扩增产物溶解曲线分析仅出现单一特异峰,无引物二聚体,Tm值为(83.83±0.08)℃,对猪圆环病毒(PCV1和PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪博卡病毒5型(PboV5)核酸均无阳性信号扩增,可重复性好,组内变异系数为0.39%~ 1.69%,组间变异系数0.69%~ 2.19%.本方法的建立可用于定量分析猪细环病毒感染噬性组织器官和感染程度,为研究猪细环病毒的致病机制奠定基础.

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