马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备

白宇; 童铁钢; 刘光亮; 肖一红; 王群; 徐树兰; 张维军; 吴东来

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马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备

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采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中.通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,mEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a (+).重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.结果表明,mEIFN-γ基因全长为441 bp,含一个开放阅读框,编码146个氨基酸的成熟蛋白;对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,重组蛋白相对分子量约为18 Ku,且具有免疫反应活性.mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下,采用Ni+亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体,为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2007年第11期|878-882|共5页
作者
白宇; 童铁钢; 刘光亮; 肖一红; 王群; 徐树兰; 张维军; 吴东来;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
马γ-干扰素; 表达; 纯化; 多克隆抗体;

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