SARS冠状病毒PUP5蛋白的表达、纯化及鉴定

王红霞; 孟庆文; 刘永刚; 施建忠; 孔宪刚; 冉多良; 吴东来

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经RT-PCR扩增了SARS冠状病毒(SARS-CoV)BJ01株的PU5基因(putative uncharacterized gene 5)的cDNA,将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,命名为pGEX-PU5,测序正确后将阳性质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白命名为pGEX-PUP5,并用Glutathione SwpharoseTM 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,然后用PreScissionTM Protease酶对融合蛋白进行解离,获得PUP5蛋白,用抗SARS-CoV卵黄抗体IgY和GST-tag单克隆抗体分别对表达的目的蛋白做Western blot鉴定,证明所表达的蛋白具有免疫学活性.本研究应用原核表达系统表达了PUP5蛋白,为进一步解析该蛋白功能奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2006年第4期|457-460465|共5页
作者
王红霞; 孟庆文; 刘永刚; 施建忠; 孔宪刚; 冉多良; 吴东来;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

新疆农业大学,动物医学院,新疆,乌鲁木齐,830052;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

新疆农业大学,动物医学院,新疆,乌鲁木齐,830052;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

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正文语种 chi
中图分类正股单股RNA病毒;
关键词
SARS冠状病毒; PUP5蛋白; 表达;

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