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猪流感病毒核蛋白基因的原核表达及其在诊断中的初步应用

         

摘要

根据GenBank中A/Swine/Hong Kong/126/82(H3N2)株猪流感病毒(SIV)NP基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR扩增了我国SIV分离株A/Swine/Heilongjiang/3/2000(H3N2)的核蛋白(NP)基因.将扩增所得NP基因克隆于pMD18-T载体,酶切鉴定后对其序列分析表明NP基因与香港分离株同源性高达93.8%,然后定向亚克隆NP基因于原核表达载体pET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有NP基因的重组质粒命名为pET-NP.用pET-NP转化受体菌BL21,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品.经SDS-PAGE电泳分析证实NP基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG诱导下,6 h其表达量达到高峰,经Western blot分析证实表达的重组核蛋白具有反应活性,大小约为60kD.用表达产物作琼脂扩散试验,结果表明表达产物与SIV抗血清可形成清晰的反应沉淀线,而与其它9种猪病原阳性血清不发生反应.正常菌体蛋白与SIV阳性血清也不发生反应.通过对40份送检血清样品的检测结果显示其与HI试验的相符率高达95%以上.试验证明利用原核表达系统制备的重组核蛋白作为诊断用抗原,不仅制备过程简单而且所建立的琼扩诊断方法特异、快速、简便,其灵敏度也能满足现地的使用要求.目前正在进行现地的中试试验.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2004年第1期|18-21|共4页
  • 作者单位

    中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 负股单股RNA病毒;基因工程(遗传工程);
  • 关键词

    SIV; 核蛋白; 琼脂扩散试验;

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