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伪狂犬病病毒通用转移载体的构建及应用

         

摘要

将来自质粒pFSV40的300bp BamHI/PstI片段[其中含有SV40 poly(A)和部分多克隆位点]插入到质粒pUSK相应的酶切位点中,获得重组质粒pUSKSV40,该重组质粒中gG基因5'端编码区缺失了428bp.将来自质粒pcDNA3.1(+)的946bpBglⅡEcoRI片段(其中含CMV启动子及部分多克隆位点)插入到质粒pUSKSV40的BamHIEcoRI位点,构建了通用载体pPRVCMV-uni,其中含有CMV启动子、SV40 poly(A)以及NheI、Pmel、BamHI、BstXI、EcoRI、StuI、XbaI等7个单一克隆位点.将eGFP基因插入到该通用载体的BamHI和EcoRI之间,用所获得的转移载体与TK-/gG-/LacZ+PRV基因组共转染PK-15细胞,经检测eGFP基因在重组伪狂犬病病毒中获得表达,从而证实该通用载体的构建是可行的.本研究研制以伪狂犬病病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础.

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