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猪博卡病毒G1基因群和猪流行性腹泻病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

         
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为建立同时快速定量检测猪博卡病毒(PBoV)G1基因群和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究参照GenBank登录的PBoV的NP1基因和PEDV的M基因保守序列,设计了引物和探针,经优化反应条件后,建立了能够同时检测PBoV G1基因群和PEDV的双重TaqMan荧光定量PCR方法.特异性试验结果显示该方法与PCV2、PRV、PDCoV、PRoV和TGEV无交叉反应,敏感性试验结果显示该方法对PBoV、PEDV的质粒标准品检测下限分别为21.8拷贝/μL和31.7拷贝/μL;且组内、组间变异系数均小于4％,重复性好.应用本实验建立的方法对2017年5月～2018年8月,河北省部分地区采集的142份仔猪腹泻样品检测结果显示,PBoV G1阳性率为18.3％(26/142),PEDV阳性率为62.7％(89/142),其中PBoV G1与PEDV共感染率为10.6％(15/142),该方法优于常规PCR方法.本研究建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法对PBoV和PEDV的准确检测、 病原监测、 流行病学调查等均具有重要意义.

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