基于生长素诱导降解系统条件性敲除弓形虫ATG6蛋白的研究

陈运通; 陈赫明; 付佳雯; 庞宇; 郑君; 贾洪林

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基于生长素诱导降解系统条件性敲除弓形虫ATG6蛋白的研究

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cqvip:为构建生长素诱导降解系统的弓形虫条件性基因缺失虫株,本研究首先利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选获得Tg Ku80基因缺失虫株,然后采用该缺失虫株,利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选,将生长素诱导降解因子(AID)插入该弓形虫Tg ATG6基因序列的5’端得到TgATG6条件性敲除虫株TgATG6-i KD。PCR扩增及测序结果显示,以TgATG6-iKD虫株为模板可扩增出AID标签,而在野生型虫株中,不能有效扩增该靶序列,经测序验证也得到相符结果,表明AID标签序列能够高效定点插入到弓形虫Tg Ku80基因缺失虫株中;通过蛋白免疫印迹试验能够在TgATG6条件性敲除虫株检测到AID标签和TgATG6蛋白的融合表达;蛋白免疫印迹试验及间接免疫荧光实验结果显示,利用生长素(NAA)能够快速诱导融合表达蛋白的降解。本研究通过蛋白N端融合AID共表达,建立了高效条件性敲除弓形虫基因的方法,为进一步研究弓形虫相关基因的功能奠定基础。

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来源
《中国预防兽医学报》 |2019年第10期|1015-1020|共6页
作者
陈运通; 陈赫明; 付佳雯; 庞宇; 郑君; 贾洪林;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150069;

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正文语种 chi
中图分类兽医寄生虫病学;
关键词
弓形虫; 植物生长激素; 条件性敲除; TgATG6;

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