首页> 中文期刊> 《中国预防兽医学报》 >稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系的建立

稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系的建立

开具论文收录证明 >>

期刊封面封底目录下载 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

为建立基于CRISPR-Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究利用慢病毒载体pMD2.G、pSPAX2(HIV-1的gag-pol表达质粒)和lentiCRISPR v2-Hyg包装慢病毒,感染HeLa细胞2 d后用400μg/mL潮霉素培养液筛选两周,获得稳定表达Cas9蛋白的多克隆细胞系.利用流式细胞分选系统分选及western blot鉴定获得9株HeLa-Cas9单克隆细胞系.为获得具有高效率敲除内源基因的HeLa细胞系,利用同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和GFP sgRNA的慢病毒感染HeLa-Cas9单克隆细胞系,经1μg/mL嘌呤霉素培养液筛选一周,流式细胞术检测表达绿色荧光蛋白细胞的百分比,以计算HeLa细胞株的敲除效率,进而建立了一株稳定表达Cas9蛋白的具有高敲除效率的HeLa单克隆细胞系.该细胞的Cas9敲除效率为87％,CCK-8检测结果表明其具有很好的细胞活性.本研究获得的具有高敲除效率的稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系可以用于CRISPR敲除文库的转导,建立基因敲除细胞文库,为筛选参与特定功能的未知蛋白提供细胞平台.

著录项

来源
《中国预防兽医学报》 |2020年第9期|893-898|共6页
作者
刘燕飞; 那雷; 王晓钧;
展开▼
作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨 150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨 150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨 150069;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类家畜微生物学（兽医病原微生物学）;
关键词
Cas9蛋白; HeLa细胞系; 基因敲除效率;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. SARI基因真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立 [J] . 郑德柱 . 福建医药杂志 . 2015,第002期
2. DC-SIGN真核表达载体的构建及其稳定转染HeLa细胞系的建立 [J] . 王欣 ,詹媛 ,王琰 . 中国动物传染病学报 . 2015,第003期
3. 稳定表达人CD14细胞系Hela-CD14的建立 [J] . 宁铂涛 ,宋华 ,杨世隆 . 浙江大学学报（医学版） . 2012,第005期
4. 稳定表达hNIS基因的人宫颈癌HeLa细胞系的建立及鉴定 [J] . 凌莉 ,汤亚莉 ,张弘 . 现代妇产科进展 . 2011,第11期
5. 反转录病毒介导的稳定表达HIV-1Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立 [J] . 王婧 ,李昌 ,李林溪 . 畜牧兽医学报 . 2011,第002期
6. 稳定表达猪瘟病毒Npro蛋白PK-1 5细胞系的建立 [C] . 凌理军 ,李素 ,李永锋 . 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会 . 2012
7. 利用CRISPR/Cas9技术构建C3基因敲除猪模型和稳定表达红色荧光蛋白的人胚胎干细胞系的建立 [A] . 张纬 . 2017

获取原文

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

客服微信
服务号