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首页> 中文期刊> 《中国预防兽医学报》 >A、B、J和K亚群禽白血病病毒多重PCR检测方法的建立及应用

A、B、J和K亚群禽白血病病毒多重PCR检测方法的建立及应用

         
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为快速检测鸡群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)感染状态,本研究针对鸡群中主要流行的外源性ALV亚群ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K,设计通用上游引物PF和特异性下游引物AR、BR、JR和KR,通过构建质粒标准品,对最适引物浓度、退火温度及循环数等反应条件进行优化,建立了能同时检测ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的多重PCR方法,进一步对其特异性、敏感性和重复性进行评估.结果 显示,采用0.2 μmol/L PF、0.1μmol/L AR、0.1μmol/L BR、0.1μmol/L JR和0.1 μmol/L KR,56.0℃退火温度和30个循环的反应条件建立的多重PCR方法检测效果最优.该方法能特异性地检测出ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的单一或混合感染,而对其它禽源病毒无特异性扩增;该方法对质粒标准品的检测下限为1×103拷贝/μL,敏感性较高;利用该方法对3个浓度混合质粒模板的检测,显示出良好的批内和批间重复性.利用本研究建立的多重PCR方法与传统病毒分离方法对96份表观健康鸡抗凝血样品及21份肿瘤组织样品进行检测,结果显示该多重PCR方法检出率更高,二者符合率99.1％.利用建立的多重PCR方法检测119份ALV阳性样品,结果显示,单一感染ALV-J检出率最高(43.7％),其次为ALV-K(17.6％);除单一感染外,地方品种鸡群还存在ALV-B+J、ALV-J+K的二重感染,以及ALV-A+B+J、ALV-A+B+K、ALV-B+J+K的三重感染.本研究为禽白血病流行病学调查及外源性ALV初步鉴定提供了技术支撑.

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