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Loop6、Loop7和Loop8参与副猪嗜血杆菌OmpP2抗血清的杀菌作用研究

         
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摘要

为研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P2(OmpP2)不同表面环状结构(Loop)在HPS抗血清杀菌过程中发挥的作用.本研究以pBAD 18-Km质粒和HPS SC096为模板,PCR扩增卡那霉素抗性基因(Km)片段和含ompP2 TTA终止密码子下臂基因片段.通过重叠延伸PCR扩增融合基因片段Km-ompP2克隆至自杀性质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀性质粒pZY01.以HPS SC096为模板经PCR分别扩增ompP2 Loop1～Loop8上臂片段和ompP2 Loop 1～Loop 8下游片段,并经重叠延伸PCR扩增各loop基因融合片段(分别缺失Loop1～Loop8基因序列的ompP2片段)并克隆至pZY01,构建各Loop基因缺失的自杀性质粒pZY02～pZY08,所有的自杀性质粒均经PCR鉴定.将正确构建的自杀性质粒pZY01～pZY08通过自然转化法转化至ompP2基因缺失的HPS SC096(SC096ΔompP2)中,构建了 HPSompP2ΔLoop缺失菌株,并均经PCR鉴定后在TSA中传10代,通过PCR方法检测其遗传稳定性.结果显示,正确构建了 8个自杀性质粒pZY01～pZY08及缺失各Loop基因的HPSompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8,共5个HPS ompPP2ΔLoop缺失菌株,且各缺失菌株的Loop基因均能够稳定缺失,表明其均具有较好的遗传稳定性.未获得HPS ompP2ΔLoop1、ompP2ΔLoop3和ompP2ΔLoop4缺失菌株.制备新鲜兔血清并分别测定不同HPSompP2ΔLoop缺失菌株在50％和90％兔血清中的存活率,分析不同缺失菌株的抗兔血清中补体介导的杀菌作用.结果显示,与HPSΔompP2菌株相比,HPS ompP2ΔLoop2菌株在50％和90％兔血清中的存活率分别增加了 4×105倍和1×106倍;HPS ompP2ΔLoop5菌株在50％和90％兔血清中的存活率分别增加了 3×105倍和1×106倍;HPS ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8的存活率无显著变化.与野生型SC096株相比,在50％兔血清中,HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompPP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8缺失菌株的存活率分别降低了 53.7％、60.1％、99.8％、99.6％和99.9％;在90％兔血清中,上述HPS ompP2ΔLoop菌株的存活率分别降低了 78.0％、84.4％、99.9％、99.9％和99.9％.以上结果表明Loop6、Loop7和Loop8参与OmpP2的抗血清杀菌作用,且这三者可能是OmpP2重要的活跃肽段.本研究为探究HPS ompP2的毒力机制提供参考.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2021年第6期|639-645|共7页
  • 作者

    何欣怡; 周叶; 周群; 曹慧; 宋鑫; 岳华; 张斌;

  • 作者单位

    西南民族大学畜牧兽医学院 四川 成都610041;

    西南民族大学畜牧兽医学院 四川 成都610041;

    西南民族大学畜牧兽医学院 四川 成都610041;

    西南民族大学畜牧兽医学院 四川 成都610041;

    西南民族大学畜牧兽医学院 四川 成都610041;

    西南民族大学畜牧兽医学院 四川 成都610041;

    青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室 四川 成都 610041;

    西南民族大学畜牧兽医学院 四川 成都610041;

    青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室 四川 成都 610041;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 病原细菌;
  • 关键词

    副猪嗜血杆菌; 外膜蛋白P2; 表面环状结构; 血清杀菌作用;

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