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potA基因缺失对猪链球菌2型生物学特性及致病性影响的研究

         

摘要

为了探究potA基因对猪链球菌2型(SS2)生物学特性和致病性的影响,本研究利用同源重组系统构建potA基因缺失突变株(ΔpotA),并经PCR和western blot鉴定。采用显微镜观察、生长曲线测定和平板计数等方法比较ΔpotA和野生SC-19菌株的细胞形态和生长速率。结果显示,相比于SC-19菌株,ΔpotA菌株的链长极显著增长(P0.05),但两组小鼠脑、肺和脾等组织中的载菌量均无显著差异(P>0.05),表明potA基因的缺失导致SS2对小鼠的致病性增强,但与SS2在组织中的定植能力无关;通过ΔpotA和SC-19菌株对HEp-2细胞的粘附及侵入试验和qRT-PCR检测两种菌中的粘附及侵入相关基因(srtA、aupA、sao、fbps、gapdH、eno、sadP、ccpA和dltA)的转录水平,进一步探究potA基因的缺失导致SS2对小鼠致病性增强的机制。结果显示,和SC-19菌株相比,ΔpotA对HEp-2细胞的粘附及侵入数量均极显著升高(P2,P<0.001),表明potA基因的缺失促进了SS2粘附及侵入相关基因的转录,从而增强了SS2对HEp-2细胞粘附及侵入的能力。本研究首次证实,ΔpotA菌株的致病能力增强与菌株的自身生长速率和组织定植能力无关,而是由于potA基因的缺失促进了SS2粘附及侵入相关基因的转录,增强了其对细胞的粘附及侵入的能力。本研究为进一步研究SS2 potA基因的功能及致病机制提供了数据参考。

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