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L5多肽介导的链霉亲和素-聚乙二醇-超小超顺磁性氧化铁纳米复合物对磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3阳性肝细胞癌细胞进行预定位MRI的实验研究

         
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目的探讨生物素化L5（L5-BT）多肽介导的链霉亲和素-聚乙二醇-超小超顺磁性氧化铁（SA-PEG-USPIO）纳米复合物对磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）阳性肝癌细胞进行预定位体外MRI的价值。方法用羧基荧光素（FAM）修饰的L5多肽（L5-FAM）对HepG2肝癌细胞及HL-7702正常肝细胞进行免疫荧光染色,并进行竞争抑制实验,在倒置荧光显微镜下观察荧光表达。采用间接免疫荧光法验证GPC3表达。制备SA-PEG-USPIO纳米复合物,并以聚乙二醇-超小超顺磁性氧化铁（PEG-USPIO）为对照测定两者的水合粒径、表面电位及T2弛豫率,并体外测定二者的细胞毒性。将HepG2细胞和HL-7702细胞按照加入试剂的不同分为L5-BT介导SA-PEG-USPIO组、SA-PEG-USPIO组和空白组共3组,行普鲁士蓝染色,并行体外MRI,记录标准化T2信号强度。采用单因素方差分析比较3组间的标准化T2信号强度差异。结果倒置荧光显微镜下,多肽L5出现在HepG2细胞表面及胞质内,竞争实验组及HL-7702细胞组荧光明显减少,HepG2肝癌细胞有较强的GPC3阳性表达染色。分子探针SA-PEG-USPIO构建成功。SA-PEG-USPIO水合粒径为（35.97±5.19）nm,分散系数（PdI）为（0.17±0.05）,Zeta电位为（-7.91±1.22）mV;PEG-USPIO水合粒径为（22.73±3.31）nm,PdI为（0.21±0.02）,Zeta电位为（4.22±0.53）mV。SA-PEG-USPIO和PEG-USPIO的T2弛豫率分别为0.103 9×10~3和0.139 4×10~3mM-1s-1。Fe浓度达到2.4 mmol/L时,HL7702细胞存活率均可达到80%以上。普鲁士蓝染色显示,L5-BT介导SA-PEG-USPIO组中HepG2细胞的胞膜、胞质内可见大量蓝染铁颗粒,其他各组明显减少。体外MRI,L5-BT介导SA-PEG-USPIO组、SA-PEG-USPIO组和空白组的HepG2细胞标准化T2WI信号强度分别为39±7、77±12、93±4,差异有统计学意义（P＜0.01）;各组HL-7702细胞的标准化T2WI信号强度分别为69±11、78±8、95±5,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论利用L5多肽介导的二步预定位方法,应用PEG修饰的USPIO,对人肝癌细胞HepG2具有良好的靶向性。

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