大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

汪琦; 徐逸; 王伟; 朱舟

首页> 中文期刊> 《中国康复》 >大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

开具论文收录证明 >>

期刊封面封底目录下载 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

目的:构建缝隙连接蛋白connexin 43(CX43)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行基因治疗研究奠定基础.方法:合成CX43发夹样shRNA的DNA单链一对和对照单链scramble一对,退火后将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因的穿梭质粒pAd shRNA/H1,得到pAd shRNA/H1-CX43和pAd shRNA/H1-scramble.分别酶切及DNA测序鉴定后,经Pme I线性化后转化入BJ5187-AD-1感受态细菌,在细菌内进行同源重组构建含目的基因的重组腺病毒质粒载体.用Pac I酶切鉴定重组菌.将Pac I酶切重组的两种腺病毒质粒载体后,经脂质体转化293细胞进行包装得到重组的腺病毒颗粒,并通过293细胞绿色荧光表达反应重组腺病毒表达情况.将重组的腺病毒Ad-Cx43 shRNA和对照病毒Ad-scramble shRNA分别感染大鼠原代培养的星形胶质细胞, 并检测星形胶质细胞CX43的表达.结果:证实穿梭质粒的以及重组腺病毒质粒均构建正确,腺病毒质粒转染293细胞后48 h即可见绿色荧光蛋白表达,10 d后全部细胞表达绿色荧光,并有半数细胞飘起,收获病毒感染培养星形胶质细胞后48 h,均有绿色荧光表达,经感染Ad-Cx43 shRNA的星形胶质细胞CX43的表达明显低于感染对照病毒Ad-scramble shRNA的星形胶质细胞.结论:成功构建表达大鼠CX43 特异性发夹状shRNA的重组腺病毒载体,将为应用基因沉默技术研究CX43在神经系统疾病尤其是缺血性脑损伤中的作用提供依据.

著录项

来源
《中国康复》 |2010年第6期|411-415|共5页
作者
汪琦; 徐逸; 王伟; 朱舟;
展开▼
作者单位

华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,400030;

华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,400030;

华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,400030;

华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,400030;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类康复医学;脑血管疾病;
关键词
CX43; 腺病毒载体; RNA干扰; 基因治疗; 缺血性脑损伤;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 大鼠shRNA-Slfn1重组腺病毒载体的构建与鉴定 [J] . 刘姿麟1 ,林慕之1 ,况春燕12 . 贵州医科大学学报 . 2017,第002期
2. 大鼠shRNA-Slfn1重组腺病毒载体的构建与鉴定 [J] . 刘姿麟 ,林慕之 ,况春燕 . 贵阳医学院学报 . 2017,第002期
3. 编码大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定 [J] . 张沁丽 ,秦新月 ,殷成 . 第四军医大学学报 . 2008,第001期
4. HPV18 E6、E7基因-shRNA重组腺病毒表达载体的构建及鉴定 [J] . 李钢 ,冯彪 ,邓彦超 . 世界华人消化杂志 . 2014,第24期
5. CXCR4-shRNA重组腺病毒表达载体的构建及鉴定 [J] . 陆航 ,孙巨峰 ,刘学政 . 山东医药 . 2011,第046期
6. 大鼠心肌细胞缝隙连接蛋白43的shRNA慢病毒载体的构建和鉴定 [C] . 陈立 ,钟国强 ,涂荣会 . 第14届中国南方国际心血管病学术会议 . 2012
7. 大鼠shRNA-Slfn1重组腺病毒载体的构建及其对血管平滑肌细胞增殖的影响 [A] . 刘姿麟 . 2017

大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅