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地塞米松诱导体外培养成骨细胞凋亡作用机制的研究

         
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目的研究地塞米松对体外培养的成骨细胞增殖和凋亡的影响,及其可能的作用机制。方法体外分离培养SD大鼠成骨细胞,观察细胞形态,应用碱性磷酸酶染色法和茜素红染色法鉴定成骨细胞。取1～3代对数生长期细胞,分为空白对照组、低剂量地塞米松组(10-8mol/L)、中剂量地塞米松组(10-7mol/L)、高剂量地塞米松组(10-6mol/L),分别干预12、24、48 h,运用Cell Counting Kit-8法检测细胞增殖情况,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光法观察细胞核的形态和caspase-3的表达,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bad、caspase-3、磷酸化Akt的表达。采用单因素方差分析,两两比较方差齐采用LSD-t法进行统计分析。结果 10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L。地塞米松能抑制成骨细胞增殖,以48 h最为明显（A值分别为:0.980±0.028,0.798±0.057,0.728±0.031）,与空白对照组（1.143±0.017）相比,差异有统计学意义（t=5.454,11.555,13.908;P均＜0.05）;不同浓度地塞米松干预48 h后,成骨细胞凋亡率逐渐升高。与空白对照组[（4.1±0.8）%]相比,10-8mol/L地塞米松组细胞凋亡率[（4.9±1.2）%]升高差异无统计学意义（t=0.470,P＞0.05）,10-7mol/L、10-6mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡率分别为（9.8±2.6）%、（12.4±2.6）%,呈显著性升高（t=3.508,5.140,P均＜0.05）;免疫荧光检测结果显示,不同时间地塞米松作用后,成骨细胞caspase-3表达逐渐增强,其中10-7mol/L、10-6mol/L地塞米松组的caspase-3表达显著增加（t=4.320,t=8.475;P＜0.05）;蛋白质印迹法检测结果显示,地塞米松干预浓度为10-7mol/L和10-6mol/L时,Bcl-2蛋白表达分别较空白对照组减少53.8%、78.4%（t=4.109,5.988;P＜0.05）,p-Akt蛋白表达分别减少37%、49.6%（t=2.067,3.491;P＜0.05）,Bad蛋白表达分别增加276.9%、334.8%（t=7.342,8.872;P＜0.05）,caspase-3蛋白表达分别增加138.0%、193.9%（t=5.510,7.750;P＜0.05）。结论地塞米松可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,抑制Bcl-2的表达,并上调Bad、caspase-3的表达导致成骨细胞的增殖减少,凋亡增加。

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