PI3K/Akt信号通路在羧甲基壳聚糖保护一氧化氮诱导软骨细胞凋亡中的作用及机制研究

贺斌; 陶海鹰; 卫爱林; 刘世清; 陈庆; 丁万军

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目的研究羧甲基壳聚糖（CMCS）对一氧化氮诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用,并探索PI3K/Akt信号转导通路在该过程中的作用及其机制。方法体外培养大鼠膝关节软骨细胞,通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞;3 mmol/L硝普钠诱导软骨细胞构建凋亡模型;实验分为空白对照组、硝普钠诱导凋亡组、硝普钠+不同浓度CMCS处理组、硝普钠+CMCS+PI3K抑制剂Wortmannin处理组。通过细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）对软骨细胞增殖活性进行检测,流式细胞技术检测软骨细胞凋亡率,荧光定量PCR检测软骨细胞内MMP-13及基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）-1 mRNA的表达水平,通过蛋白印迹法检测软骨细胞内Akt及p-Akt表达水平,采用单因素方差分析进行统计学处理。结果 3 mmol/L硝普钠可以抑制软骨细胞增殖活性（吸光度值0.221±0.023）,与对照组（0.736±0.032）比较降低70%（F=8.203,P=0.021）,诱导软骨细胞发生早期凋亡,早期凋亡率为（68.8±5.2）%;增加软骨细胞内MMP-13 mRNA表达,降低TIMP-1 mRNA表达;加入CMCS后软骨细胞增殖活性有所增加,软骨细胞凋亡降低,凋亡率降低为（14.7±2.3）%;并且CMCS可以激活硝普钠诱导软骨细胞内Akt激活,增加p-Akt蛋白表达水平,CMCS可以恢复硝普钠诱导软骨细胞内MMP-13 mRNA增加及TIMP-1 mRNA降低。结论 CMCS对硝普钠诱导软骨细胞凋亡具有一定的保护作用,PI3K/Akt信号通路的激活在该过程中起重要作用。

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来源
《中华风湿病学杂志》 |2015年第3期||共页
作者
贺斌; 陶海鹰; 卫爱林; 刘世清; 陈庆; 丁万军;
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作者单位

武汉大学人民医院骨科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类软骨疾病;
关键词
软骨细胞; 一氧化氮; 细胞凋亡; 羧甲基壳聚糖; PI3K/Akt;

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