抗SSA噬菌体抗体库的构建及鉴定

周炜; 张奉春; 唐福林; 董怡

首页> 中文期刊> 《中华风湿病学杂志》 >抗SSA噬菌体抗体库的构建及鉴定

抗SSA噬菌体抗体库的构建及鉴定

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

目的用噬菌体展示技术构建抗SSA单链抗体库.方法分离抗SSA抗体阳性病人外周血单个核细胞,提取RNA并反转录cDNA.扩增免疫球蛋白重链可变区(VH)和κ链可变区(Vκ).通过重叠聚合酶链反应(PCR)用连接片段将VH和Vκ体外连接成单链抗体(single-chain Fv,scFv)基因.而后用SfiⅠ和NotⅠ酶切并与噬菌粒pHEN2连接;将pHEN2-scFv电转至大肠杆菌TG1,建立抗SSA scFv cDNA库.随机挑选克隆用PCR扩增插入片段了解插入效率.用辅助噬菌体VCS-M13感染含pHEN2-scFv的TG1,产生scFv噬菌体抗体.用酶联免疫吸附(ELISA)检测构建的scFv噬菌体抗体库中有无抗SSA抗体存在.结果与VH和Vκ支架结构互补的引物可扩增出300～400 bp大小VH和Vκ片断;重叠PCR体外连接成约800 bp大小scFv基因(VH-linker-Vκ).将scFv基因克隆至pHEN2,电转TG1后计数克隆数为3.0×107 cfu.随机挑选12个克隆,其中11个克隆PCR扩增出插入片段,插入效率约为91%.用辅助噬菌体VCS-M13感染含pHEN2-scFv的TG1后,产生1.2×1014pfu/ml噬菌体抗体颗粒.抗SSA ELISA试剂盒检测其抗SSA活性,scFv噬菌体抗体的A值比相同稀释度的VCS-M13的A值高2.0～2.2倍.结论建立的抗SSA scFv噬菌体抗体库含有的独立克隆数为3.0×107 cfu,插入效率约91%,ELISA检测证实此抗体库中存在抗SSA抗体.可进一步进行亲和力筛选以得到单克隆抗SSA scFv抗体.

著录项

来源
《中华风湿病学杂志》 |2003年第7期|394-398|共5页
作者
周炜; 张奉春; 唐福林; 董怡;
展开▼
作者单位

100730,中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院风湿免疫科;

100730,中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院风湿免疫科;

100730,中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院风湿免疫科;

100730,中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院风湿免疫科;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类医学免疫学;
关键词
自身抗原; 细菌噬菌体; 抗体;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 抗速灭威噬菌体单链抗体库的构建、筛选及鉴定 [J] . 李铁军 ,李德全 . 湖北农业科学 . 2011,第009期
2. 全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库的构建及筛选鉴定 [J] . 谢平丽 ,李官成 ,李艳东 . 生命科学研究 . 2010,第001期
3. 鼠源抗AFB1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定 [J] . 裴世春 ,孙大庆 ,郭德军 . 齐齐哈尔大学学报（自然科学版） . 2010,第006期
4. 抗人β-淀粉样肽特异性单链抗体的噬菌体抗体库的构建与初步鉴定 [J] . 段朝晖 ,毛越苹 ,罗晓红 . 第四军医大学学报 . 2008,第009期
5. 人源天然Fab噬菌体抗体库的构建及抗c-Met抗体的筛选、鉴定 [J] . 万佳艺 ,孙慧 ,焦永军 . 南京医科大学学报（自然科学版） . 2008,第006期
6. 人源天然Fab噬菌体抗体库的构建及抗c-Met抗体的筛选、鉴定 [C] . 万佳艺 ,刘政 ,孙慧 . 2009中国南京ERCP、EUS、ESD论坛 . 2009
7. 1:干扰素诱导蛋白10在干燥综合征唇腺中异常表达的研究;2:抗SSA/Ro噬菌体单链抗体库的构建与鉴定 [A] . 周炜 . 2001

抗SSA噬菌体抗体库的构建及鉴定

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅