应用完整外显子2/3序列解决HLA-DRB1座位基因分型的歧义结果

李桢; 杨鹃; 程良红; 邹红岩

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应用完整外显子2/3序列解决HLA-DRB1座位基因分型的歧义结果

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背景:人类白细胞抗原基因测序分型中,当等位基因的差异碱基位于测序范围之外或不同等位基因对的杂合序列相同时,无法得到清晰的结果。目的:通过完整外显子2/3序列的测定,解决常规HLA-DRB1基因分型中的高比例歧义结果。方法:初次分型采用常规的测序方法检测320份样本的HLA-DRB1外显子2第一高变区以外的序列,测序反应设置codon86。后期采用一次性扩增外显子2/3,测序反应针对外显子2设置组特异性引物:DRB1*04/07/09为一组,其它基因家族为一组,设置conden86,对初次分型后为歧义结果的样本重新分型。结果与结论:初次分型有180份样本为歧义结果,占总样本数的56.25%。其中A类为差异碱基位于测序范围之外,共114例;B类为等位基因对的杂合序列相同,共17例;C类为两种情况同时存在,有49例。3种类别的歧义等位基因数分别为119个、34个、98个,占等位基因总数的33.06%、9.44%、27.22%。完整外显子2/3序列的测定使歧义结果比例从56.25%下降到14.37%,其中A类103例、B类8例、C类23例样本的等位基因得到确认。此次研究中发现了一个新等位基因,与跟它最相近的等位基因DRB1*110101相比,其外显子3的第381位碱基G>T,导致第98位氨基酸AAG(赖氨酸Lys)>AAT(天冬酰氨Asn)。序列已提交Genbank,编号HM807583,2010-08被世界卫生组织HLA因子命名委员会命名为HLA-DRB1*1197(编号HWS10010999)。提示,完整外显子2/3序列的测定能大幅降低歧义分型结果的比例。

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来源
《中国组织工程研究》 |2011年第44期|8308-8312|共5页
作者
李桢; 杨鹃; 程良红; 邹红岩;
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作者单位

深圳市血液中心免疫遗传研究室;

大连医科大学检验医学系;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物医学工程;
关键词
人类白细胞抗原; 聚合酶链式反应-基因测序分型; 外显子; 歧义等位基因; 组序列特异性引物;

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