白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD306)真核表达载体构建及蛋白的纯化与鉴定

王春艳; 康振华; 谢鑫; 李妍; 金伯泉

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白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD306)真核表达载体构建及蛋白的纯化与鉴定

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背景:目前国内外对白细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyte-associated immunoglobulin like-receptor,LAIR)家族中LAIR1的生物学功能研究已较清晰,而关于LAIR-2分子在机体内的生物学功能尚缺乏相关报道。目的:为进一步研究LAIR-2的体内生物学功能,构建其真核表达载体,纯化并鉴定蛋白。设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2007-06/2008-06在解放军第四军医大学完成。材料:载体pIg/3c由英国牛津大学徐小宁博士惠赠。载体pcDNA3.1由荷兰Meyaard博士惠赠。中国仓鼠卵巢细胞系CHO由解放军第四军医大学免疫学教研室冻存。方法:构建pIg/3c-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2两个真核表达载体,电转染法转染CHO细胞建立稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长蛋白分子的细胞株,通过Westernblot、细胞免疫化学、流式细胞术分析实验鉴定真核表达LAIR-2蛋白分子与抗原核表达LAIR-2mAbs的结合活性。主要观察指标:稳定转染细胞系的建立及真核表达蛋白的纯化和鉴定。LAIR-2蛋白与相应单克隆抗体的结合活性。结果:构建真核表达载体并成功转染CHO细胞,建立稳定分泌LAIR-2-Fc融合蛋白的转染细胞系及稳定分泌LAIR-2蛋白的转染细胞系,分别命名为CHO/LAIR-2-Fc以及CHO/LAIR-2。Westernblot实验表明真核表达的LAIR-2全长蛋白分子均可与三株抗LAIR-2mAb1A7、3H12及4A9发生特异性结合反应。免疫细胞化学、流式细胞术分析实验结果表明抗原核细胞表达蛋白的三株LAIR-2单克隆抗体中,1A7不能结合pcDNA3.1-LAIR-2转染的CHO细胞内的LAIR-2,面3H12和4A9均可以很好结合细胞内的LAIR-2。结论:实验成功构建了pIg/3c-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2两个真核表达载体,成功转染CHO细胞并建立稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长蛋白分子的细胞株。真核表达的LAIR-2蛋白分子与抗原核表达的LAIR-2mAbs有良好的结合活性。

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来源
《中国组织工程研究》 |2009年第50期|9928-9932|共5页
作者
王春艳; 康振华; 谢鑫; 李妍; 金伯泉;
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作者单位

吉林医药学院病原教研室;

解放军第四军医大学西京医院消化病院;

西安医科大学免疫教研室;

解放军第四军医大学免疫学教研室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物医学工程;
关键词
LAIR-2; CD306; 真核表达; 蛋白; 鉴定;

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