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重组人甲状旁腺素(1-34)影响兔骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞分化的量效关系

         

摘要

目的:分析重组人甲状旁腺素(1-34)影响兔骨髓间充质干细胞增殖、向成骨细胞分化与其作用时间及剂量的关系,认识重组人甲状旁腺素(1-34)作为骨形成促进剂的部分作用方式。方法:实验于2004-11/2005-04在云南省天然药物药理重点实验室完成。选用日本大耳兔,无菌取出双侧股骨、胫骨,分离骨髓间充质干细胞并进行原代培养、传代及诱导培养。将骨髓间充质干细胞分为8组:空白对照组(完全培养基)、阳性对照组(地塞米松10-11mol/L,β-甘油磷酸10mmol/L,维生素C50mg/L)及重组人甲状旁腺素(1-34)4000,400,40μg/L组,3个剂量组又分两种给药方式,即以48h为1个循环,药物作用时间分别为6h(间歇给药,6h后换为不含药培养基)和48h(连续给药,48h换液),共作用14d。于给药后第1~7天,用改良MTT法测各组细胞吸光度值(570nm),并绘制细胞生长曲线。分别于给药后第4,7,14天用超声粉碎仪粉碎细胞,取上清液用全自动生化分析仪进行碱性磷酸酶活性测定。结果:①各组骨髓间充质干细胞的生长增殖情况比较:重组人甲状旁腺素(1-34)4000,400,40μg/L6h组间充质干细胞在给药6d后,生长速度明显高于空白对照组、阳性对照组及重组人甲状旁腺素(1-34)4000,400,40μg/L48h组(P<0.05)。②各组骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶活性比较:给药第14天,重组人甲状旁腺素(1-34)4000,400μg/L48h组碱性磷酸酶活性显著低于空白对照组(P<0.05)。结论:重组人甲状旁腺素(1-34)促进骨形成的作用与剂量及作用时间有关。间歇性给药有利于骨髓间充质干细胞的增殖,而连续大剂量给药则抑制骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化。

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