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应用激光扫描共聚焦显微镜观察骨组织微损伤的实验研究

         

摘要

目的:建立一种可以用于激光扫描共聚焦显微镜观察的骨微破裂荧光染色方法。方法:取8月龄猪髂骨1块,锯成0.90cm×0.81cm×1.89cm的规则矩形,沿长轴方向进行压缩疲劳损伤(负载大小40N,负载频率2.33Hz,负载次数30万次,湿度60%,工作温度28℃),锯成0.2cm厚骨片0.5mmol/L茜素红、吖啶橙、钙黄绿素、二甲酚橙、碱性品红和10g/碱性品红染色。另取人股骨头1个锯出1.5cm×1.0cm×0.25cm大小骨片3块,分别应用0.5mmol/L钙黄绿素、茜素红和10g/L碱性品红溶液进行染色。所有骨片常规塑料包埋,磨片至40~100μm,在激光扫描共聚焦显微镜下观察。结果:在疲劳损伤后的猪髂骨和未经疲劳损伤的人股骨头骨小梁上均可以观察到微破裂。所有荧光染料中,以钙黄绿素染色后观察效果为佳,在波长为522nm的激光扫描下发出绿色荧光。茜素红在波长为605nm的激光扫描下发出红色荧光。结论:应用钙黄绿素和茜素红染色可以对骨微破裂进行荧光染色,在激光扫描共聚焦显微镜下能够观察到清晰的骨微破裂图像。

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