磷脂酰肌醇3-激酶δ-Ras同源基因家族成员A通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能障碍中的作用

胡淑婷; 夏强; 曾晓丽; 包海荣; 刘晓菊

摘要

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶δ（PI3Kδ）-Ras同源基因家族成员A（RhoA）通路在慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）小鼠肺泡巨噬细胞（AM）吞噬功能低下中的作用。方法 40只SPF级8周龄雄性BALA/c小鼠,20只使用烟草烟雾暴露法建立慢阻肺模型,20只常规饲养。根据随机数字表分为健康对照组、慢阻肺组、健康IC87114（PI3Kδ抑制剂）组及慢阻肺IC87114组。其中IC87114组AM培养基中加入终浓度1 nmol/L IC87114培养24 h。不连续密度梯度离心法分离AM,流式细胞术测AM吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌（FITC-E.coli）的能力,以平均荧光强度（MFI）和吞噬FITC-E.coli阳性细胞百分比（吞噬%）表示;实时荧光定量PCR及蛋白印迹法（Western blot）测AM PI3Kδ、RhoA mRNA和蛋白表达;小G蛋白活性试剂测量AM RhoA活性;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架。结果 AM吞噬能力:慢阻肺组MFI和吞噬%[（4 512±517）、（32.2±4.6）%]均低于健康对照组[（9 857±1042）、（68.0±4.0）%,均P＜0.01];慢阻肺IC87114组[（6 894±472）、（50.6±2.1）%]均高于慢阻肺组（均P＜0.01）。AM PI3KδmRNA和蛋白表达:慢阻肺组（3.14±0.54、0.84±0.08）均高于健康对照组（1.00±0.00、0.57±0.07,均P＜0.01）;慢阻肺IC87114组（1.52±0.28、0.66±0.13）均低于慢阻肺组（均P＜0.01）。AM RhoA mRNA、蛋白表达及活性:慢阻肺组（0.70±0.07、0.41±0.10、0.70±0.06）均低于健康对照组（1.00±0.00、0.56±0.09、1.19±0.09,均P＜0.01）;慢阻肺IC87114组（0.91±0.08、0.48±0.06、0.86±0.06）均高于慢阻肺组（均P＜0.05）。AM细胞骨架变化:健康对照组和健康IC87114组伪足伸出良好,吞噬FITC-E.coli能力较强;慢阻肺组伪足伸出不良甚至缺失,吞噬FITC-E.coli能力受损;慢阻肺IC87114组伪足伸出情况及吞噬能力较慢阻肺组改善。相关性分析:基础状态和IC87114干预后,AM的PI3KδmRNA、蛋白表达与RhoA mRNA、蛋白表达及活性均呈负相关,PI3KδmRNA、蛋白表达与MFI均呈负相关,RhoA mRNA、蛋白表达及活性与MFI均呈正相关。结论慢阻肺小鼠AM吞噬功能低下,细胞骨架异常重排;PI3Kδ特异性调控RhoA,且两者呈负相关;慢阻肺小鼠AM PI3Kδ过度活化致RhoA活性降低从而使AM细胞骨架异常重排与其吞噬功能低下有关;PI3Kδ抑制剂IC87114抑制慢阻肺小鼠AM PI3Kδ活化,使RhoA活性改善,部分恢复慢阻肺AM吞噬功能。

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