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首页> 中文期刊> 《中华结核和呼吸杂志》 >气道损伤上皮细胞诱导成纤维细胞转分化的病理意义及离子基础

气道损伤上皮细胞诱导成纤维细胞转分化的病理意义及离子基础

         
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目的研究气道损伤上皮对上皮下成纤维细胞（SEF）转分化为肌纤维母细胞的影响,探讨支气管哮喘（简称哮喘）特征性气道重塑的机制。方法将气道上皮细胞培养槽与 SEF 或成纤维细胞胶原凝胶共培养4 d,根据培养槽中人气道上皮细胞株（16HBE）的不同处理方法分为7组。A组:培养槽中无细胞;B 组:培养槽中为正常16HBE;C 组:培养槽中为机械损伤的16HBE;D 组:培养槽中为机械损伤并经细菌脂多糖刺激的16HBE;E 组:培养槽中为预先加入内皮素受体 A 阻断剂BQ123继以机械损伤+细菌脂多糖刺激的16HBE;F 组:培养槽中为预先加入转化生长因子β1（TGF-β1）中和抗体继以机械损伤+细菌脂多糖刺激的16HBE;G 组:培养槽中为预先加入 BQ123与 TGF-β1中和抗体继以机械损伤+细菌脂多糖刺激的16HBE。应用免疫荧光、免疫印迹法观察成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况,测量各组胶原凝胶（每组计数8个样本）的直径变化,以了解转分化的肌纤维母细胞的收缩反应及其上述处理因素的影响;此外,分别选择部分 A、B、D 组共培养的 SEF 以16HBE 损伤（机械损伤+细菌脂多糖刺激24 h）上清液刺激,观察经共培养诱导转分化的 SEF 胞内钙离子([Ca2+]i)浓度的动态变化（每组至少分析6个细胞）。结果与其他各组比较,D 组 SEF 表达α-SMA 凝胶收缩百分比为[（53±8）%],与 B 组[（10±10）%]、C 组[（24±8）%]、E组[（36±9）%]、F 组[（37±3）%]、G 组[（31±7）%]比较差异均有统计学意义（F=24.80、38.10,P 均＜0.01）。共培养的成纤维细胞受16HBE 损伤培养上清液刺激后荧光强度增强,D 组增加幅度与 A、B 组比较差异有统计学意义（F=16.60、8.97,P 均＜0.01）。结论气道损伤上皮促进 SEF 转分化为表达α-SMA、具有显著收缩反应能力的肌纤维母细胞;损伤上皮通过释放内皮素1（ET-1）和TGF-β1介导了这种转分化的过程;转分化的肌纤维母细胞在损伤上皮培养上清液刺激下,[Ca2+]i内流增加可能是启动其收缩反应能力增强的早期事件。

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