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猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的构建和鉴定

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摘要

为了更有效的减轻猪圆环病毒2d亚型(PCV2d)感染对养猪业的影响,本试验利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备PCV2d病毒样颗粒(VLPs),并进行鉴定。利用无缝克隆技术将PCV2d结构蛋白Cap的全长基因分别克隆至杆状病毒载体pFastBac Dual双启动子两端,构建重组质粒pFB-cap-cap。将pFB-cap-cap质粒转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞并经蓝白斑筛选后得到穿梭质粒rBacmid-cap-cap。将穿梭质粒转染昆虫卵巢细胞Sf 9,收获含cap基因的重组杆状病毒rBV-cap-cap,并通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定Cap蛋白的表达,电镜观察是否形成VLPs。结果显示,重组质粒pFB-cap-cap经PCR鉴定构建成功,转染后收获的P1代重组杆状病毒rBV-cap-cap经PCR鉴定为阳性。IFA和Western blot鉴定结果显示,Cap蛋白成功在Sf 9细胞内表达,且能与PCV2单克隆抗体进行特异性反应。纯化后的Cap蛋白在电镜下观察能够组装成VLPs结构。结果表明,本试验在昆虫细胞-杆状病毒表达系统成功表达PCV2d Cap蛋白,并形成VLPs结构,为预防PCV2d提供参考。

著录项

来源
《中国兽医杂志》 |2023年第9期|37-41|共5页
作者
刘兆禄; 徐胜男; 丛雁方; 赵玉惠; 蒋贻海;
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作者单位

青岛蔚蓝生物股份有限公司;

青岛蔚蓝生物制品有限公司;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 S852.651;
关键词
猪圆环病毒2型; CAP蛋白; 病毒样颗粒;

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