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基于吕氏泰勒虫4种靶基因的PCR检测方法比较

         

摘要

为筛选特异、敏感的吕氏泰勒虫(Theileria luwenshuni)PCR检测基因,本试验分别以吕氏泰勒虫核糖体小亚基RNA(18S rRNA)基因、主要表面蛋白(MPSP)、内转录间隔区(ITS)基因和线粒体细胞色素C氧化酶1(Cox 1)基因为靶基因进行PCR检测,并对特异性、敏感性和临床样本检出率进行对比。结果显示,4种靶基因引物均只可扩增出吕氏泰勒虫DNA,扩增不出卵形巴贝斯虫、中华泰勒虫和附红细胞体DNA,具有较好的特异性。以18S rRNA为靶基因的PCR检测方法的敏感性最高,检测量为9.82×103 copies/μL;以cox 1为靶基因的PCR检测方法的敏感性最低,检测量为9.82×105 copies/μL。在此基础上对18S rRNA基因PCR扩增引物进行筛选,引物P3具有较好的特异性和敏感性,为最佳检测引物。临床绵羊血液样本的检测结果显示,以18S rRNA为靶基因的PCR检测方法的检出率最高,为33.33%(15/45),高于MPSP、ITS基因的26.67%(12/45)和cox 1基因的22.22%(10/45)。结果表明,以18S rRNA为靶基因的吕氏泰勒虫的PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,可用于吕氏泰勒虫病的诊断和流行病学调查。

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