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禽成髓性白血病病毒p27和gag基因的克隆

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摘要

禽成髓性白血病是由禽成髓性白血病病毒引起的一种禽白血病(Avian Leukosis).禽成髓性白血病病毒的gag基因具有高度保守性,其编码的群特异性抗原p27是禽白血病病毒所共有的主要核心蛋白,可做为禽白血病的诊断抗原.本实验采用AMV感染鸡胚成纤维细胞(CEF),提取感染细胞总RNA,用随机引物反转录成cDNA,根据已经发表的AMV BAI-A株序列设计两对针对p27基因和gag基因的特异性引物,分别进行PCR,成功地扩出p27基因和gag基因,其片段分别为793 bp和2.1 Kb.以gag基因的PCR产物为模版,采用p27的特异性引物也成功扩出p27片段.分别将p27,gag基因与pGEM-TEasy载体进行连接,转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,提取质粒,进行酶切鉴定.对含有p27基因的质粒进行测序,结果证明成功克隆了p27基因,间接证明了2.1 Kb的片段是gag基因.p27和gag基因的成功克隆为该病的探针诊断和gag基因的表达提供了基础.

著录项

来源
《中国兽医杂志》 |2001年第8期|8-10|共3页
作者
祝晓春; 陈福勇; 常建宇;
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作者单位

中国药品生物制品检定所北京崇文 100050;

中国农业大学北京海淀 100094;

中国农业大学北京海淀 100094;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 S858.326.5;
关键词
禽成髓性白血病病毒; gag基因; p27基因; RT-PCR; 基因克隆;

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