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弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定

         

摘要

目的鉴定pcDNA3-HBsAg-GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白.方法提取pcDNA3-HBsAg-GRA1质粒;体外培养COS-7细胞;pcDNA3-HBsAg-GRA1经脂质体转染体外培养的COS-7细胞;取转染后的细胞培养上清进行SDS-PAGE,Western-blot鉴定.结果成功将pcDNA3-HBsAg-GRA1转染入COS-7细胞.转染的细胞能高效表达分子为47kD分泌性融合蛋白(HBsAg-GRA1).HBsAg-GRA1能同时被HBsAb阳性人血清及弓形虫免疫兔血清所识别.结论 pcDNA3-HBsAg-GRA1在体外培养的COS-7细胞中高效表达与预期分子量大小相同,且具有免疫学活性的融合蛋白.

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