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弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅰ.pcDNA3-HBsAg-GRA1真核表达质粒的构建及鉴定

         

摘要

目的构建pcDNA3-HBsAg-GRA1真核表达质粒,为提高弓形虫DNA疫苗保护性做出新的探索,并期望"一/+-苗两用".方法采用PCR分别扩增HBsAg、GRA1;经BclⅠ、EcoRⅠ双酶切HBsAg;EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切GRA1;BamHⅠ、XhoⅠ双酶切载体pcDNA3.0;HBsAg、GRA1、pcDNA3.0双酶切纯化产物与T4DNA连接酶在22℃连接过夜,用双酶切及双脱氧末端终止法测序鉴定重组质粒.结果成功构建pcDNA3-HBsAg-GRA1真核表达质粒.结论为进一步研究pcDNA3-HBsAg-GRA1诱导的保护性免疫奠定了基础.

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