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四川株多房棘球绦虫elp基因融合表达载体的构建及其诱导表达

         

摘要

目的实现多房棘球绦虫elp基因在原核中的表达,为进一步研究多房棘球绦虫ELP抗原的诊断及免疫保护性提供前提条件.方法应用RT-PCR方法从中国四川株多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA获得elp基因编码序列,克隆测序后亚克隆于含有硫氧环蛋白(Trx)基因的高效原核表达载体pET32a(+).经酶切鉴定后以IPTG诱导表达ELP/Trx融合蛋白.SDS-PAGE及Western blot进行鉴定.亲和层析纯化ELP/Trx融合蛋白,用于ELISA检测患者血清特异性抗体.结果酶切鉴定显示本研究已将elp基因编码序列插入pET32a(+)的多克隆位点,成功地构建了pETrx-ELP融合蛋白原核表达载体.SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒转化宿主菌在IPTG诱导下高效表达了ELP/Trx融合蛋白.检测10份包虫病人血清均阳性,10份肝吸虫病、10份乙肝病人和10份健康人血清均为阴性.结论中国四川株多房棘球绦虫elp基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达,初步实验结果显示该融合蛋白对包虫病具有诊断价值.

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