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miR-519d/Twist1轴介导BrMC抑制SMMC-7721源性肝癌干样细胞体外致癌能力

         
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目的 探讨8-溴-7-甲氧基白杨素 (8-bromo-7-methoxy-chrysin, BrMC)是否通过上调 miR-519d,下调 Twist1 表达,进而抑制SMMC-7721 源性肝癌干样细胞( liver cancer stem cell-like cells, LCSLCs)体外致癌能力.方法 用球培养法从SMMC-7721细胞系得到第2 代球细胞,命名为 LCSLCs.不同浓度BrMC (1.0、3.0、10.0 μmol·L-1)处理LCSLCs,实时定量PCR检测miR-519d表达水平;球形成和琼脂集落形成实验评价体外致癌能力;荧光素酶报告基因实验和West-ern blot分析Twist1转录活性和蛋白表达;miR-519d模拟物或Twist1基因转导探讨BrMC作用的分子机制.结果 与SMMC-7721 细胞比较, LCSLCs 的 miR-519d 低表达,而Twist1蛋白高表达. BrMC(1.0、3.0、10.0 μmol·L-1)浓度依赖性降低LCSLCs球形成和琼脂集落形成率;并上调miR-519d表达、下调Twist1 蛋白表达.荧光素酶报告基因实验证实,miR-519d可以直接靶向Twist1 mRNA 3′非翻译区,并调节蛋白表达. miR-519d 模拟物增强 BrMC (3.0 μmol· L-1)的作用,然而,Twist1基因转导有效逆转BrMC (3. 0 μmol ·L-1)的效应.结论 BrMC通过调节miR-519d/Twist1信号轴,抑制SMMC-7721源性LCSLCs体外致癌能力.%Aim To determine whether 8-bromo-7-me-thoxychrysin ( BrMC) inhibits in vitro carcinogenicity via up-regulating miR-519d expression and down-regu-lating Twist1 expression in liver cancer stem-like cells ( LCSLCs) derived from SMMC-7721 cell line. Meth-ods The second generation spheroids derived from SMMC-7721 cell line were obtained by sphere-forming assay and were considered as LCSLCs . Then LCSLCs were treated with various concentrations ( 1.0, 3.0, 10.0 μmol·L-1) of BrMC. The expression level of miR-519d was detected using real-time PCR. And in vitro carcinogenicity was investigated by sphere-forming assay and clone-forming assay in agar. The transcrip-tional activity and protein expression of Twist1 were an-alyzed using luciferase reporter assay and Western blot. Moreover, the molecular mechanism of BrMC was elucidated via miR-519 mimic transfection and Twist1 gene transduction, respectively. Results Compared with SMMC-7721 cells, miR-519d-3p was low-ex-pressed and Twist1 was over expressed in LCSLCs. And the sphere-forming ratio and the clone-forming ra-tio decreased by treatment with BrMC ( 1.0, 3.0, 10.0 μmol·L-1) in a dose-dependent manner. Fur-thermore, luciferase reporter assay demonstrated miR-519d could directly target the 3′ untranslated region of Twist1 mRNA and regulate protein expression. miR-519d mimic enhanced the effects of BrMC (3.0 μmol ·L-1) . However, Twist1 gene transduction effective-ly reversed the effects of BrMC ( 3.0 μmol·L-1) . Conclusion BrMC inhibits in vivo carcinogenicity via regulating miR-519/Twist1 signal axis in LCSLCs de-rived from SMMC-7721 cell line.

著录项

  • 来源
    《中国药理学通报》 |2018年第7期|1005-1012|共8页
  • 作者

    罗祎敏; 曹晓诚; 李翔; 崔迎红; 许畅; 陈阿; 曹建国;

  • 作者单位

    南华大学医学院病理学教研室;

    湖南 衡阳 421001;

    湖南师范大学医学院药学系;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学湖南省小分子靶向药物研制与创制重点实验室;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学医学院药学系;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学湖南省小分子靶向药物研制与创制重点实验室;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学医学院药学系;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学湖南省小分子靶向药物研制与创制重点实验室;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学医学院药学系;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学湖南省小分子靶向药物研制与创制重点实验室;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学医学院药学系;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学湖南省小分子靶向药物研制与创制重点实验室;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学医学院药学系;

    湖南 长沙 410013;

    湖南师范大学湖南省小分子靶向药物研制与创制重点实验室;

    湖南 长沙 410013;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 肝肿瘤;蛋白质、结合糖、脂类;抗肿瘤、抗癌药物;
  • 关键词

    肝细胞癌; 肿瘤干细胞; 8-溴-7-甲氧基白杨素; 治疗作用; miR-519d; Twist1;

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