稳定表达CYP2A13和CYP2A13/POR的Flp-In CHO重组细胞系的构建

孙莉; 陆定艳; 刘欢; 何俊奇; 孙佳; 王永林; 李勇军; 杨畅; 刘亭

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目的分别构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13(cytochrome P450 family 2 subfamily A member 13,CYP2A13)的Flp-In CHO细胞系(CYP2A13-CHO)和稳定表达CYP2A13和细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In CHO细胞系(CYP2A13-POR-CHO),并从中筛选代谢活性较好的细胞系。方法课题组前期通过慢病毒转染构建了稳定表达POR的Flp-In CHO细胞系(POR-Flp-In CHO)。该文构建了pcDNA5/FRT-CYP2A13重组质粒,利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2A13重组质粒分别转染到Flp-In CHO细胞和POR-Flp-In CHO细胞中。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot和黄曲霉素B1(AFB1)/4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒实验来检测CYP2A13的表达及其活性,并比较了CYP2A13-CHO和CYP2A13-POR-CHO两种重组细胞系的代谢活性。结果与未转染的细胞相比,CYP2A13-CHO和CYP2A13-POR-CHO的CYP2A13 mRNA和蛋白的表达量均明显增加。且与CYP2A13-POR-CHO相比,CYP2A13-CHO细胞对AFB1、NNK的敏感度更高。结论建立了稳定表达CYP2A13且代谢活性较好的CYP2A13-CHO细胞系,为后续筛选能被CYP2A13代谢活化的前致癌物提供了工具。

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来源
《中国药理学通报》 |2022年第5期|795-799|共5页
作者
孙莉; 陆定艳; 刘欢; 何俊奇; 孙佳; 王永林; 李勇军; 杨畅; 刘亭;
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作者单位

贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室;

贵州医科大学药学院;

贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心;

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正文语种 chi
中图分类 R329.24;R345.99;
关键词
细胞色素P450家族2亚家族A成员13; 细胞色素P450氧化还原酶; 稳定表达; Flp-In CHO细胞; 代谢活性; 前致癌物;

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