人APE1/Ref-1基因真核表达质粒的构建和鉴定

谭永红; 王东; 李增鹏; 杨宇馨

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人APE1/Ref-1基因真核表达质粒的构建和鉴定

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目的构建含人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段的真核表达质粒pcDNA3.1+ APE1,以期进一步研究该基因对细胞DNA损伤的保护作用.方法采用RT-PCR法定向克隆人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段,构建pGM-T Easy/APE1质粒,测序鉴定APE1/Ref-1基因cDNA序列正确后,将目的片断亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1+上,构成pcDNA3.1+APE1表达质粒,并用Western blotting法检测转染人脐静脉内皮细胞APE1/Ref-1蛋白的表达水平.结果经酶切及测序证实APE1/Ref-1基因真核表达质粒pcDNA3.1+ APE1构建成功,Western blotting法检测到转染pcDNA3.1+APE1后,细胞内APE1/Ref-1蛋白表达明显增加.结论成功构建含人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段的真核表达质粒,为探讨APE1/Ref-1对细胞电离辐射损伤的保护作用奠定了基础.

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来源
《重庆医学》 |2007年第19期|1918-1920|共3页
作者
谭永红; 王东; 李增鹏; 杨宇馨;
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作者单位

重庆武警总队医院肿瘤中心,400061;

第三军医大学大坪医院肿瘤中心,重庆,400042;

第三军医大学大坪医院肿瘤中心,重庆,400042;

第三军医大学大坪医院肿瘤中心,重庆,400042;

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正文语种 chi
中图分类肿瘤病理解剖学、组织学;
关键词
APE1/Ref-1; 真核表达载体; DNA损伤; 电离辐射;

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