VEGF165、BMP2双基因转染SD大鼠BMSCs的实验研究

温洋; 陈丽媛; 沈师; 卓乃强

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VEGF165、BMP2双基因转染SD大鼠BMSCs的实验研究

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目的探究血管内皮生长因子165(VEGF165)、骨形态发生蛋白(BMP2)双基因转染SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)及其基因表达与体外成骨能力.方法提取SD大鼠胫骨骨髓,原代培养获得BMSCs并进行流式细胞学鉴定.通过脂质体(Lipofect-amine2000)介导VEGF165、BMP2基因转染SD大鼠BMSCs,并分为pIRES-hBMP2-hVEGF165转染组(双基因转染)、pIRES-hBMP2转染组(单基因转染)、pIRES-hVEGF165转染组(单基因转染)、空载转染组(空白对照).采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、酶联免疫吸附试验、组织学染色方法评估基因转染BMSCs的增殖情况、基因表达及体外成骨能力.结果流式细胞鉴定培养的BMSCs表面Marker示CD44和CD90标志物阳性,CD34和CD45标志物为阴性,证实成功获取大鼠BMSCs.通过荧光显微镜观察各转染组BMSCs,24 h后可见绿色荧光发出,表明转染成功.MTT结果显示:随着时间的延长,各转染组BMSCs细胞的数量呈上升趋势,与未转染BMSCs的相比,细胞数量峰值无明显差异,证实转染后BMSCs生长情况良好.ELISA染色结果显示:pIRES-hBMP2-hVEGF165转染组BMP2蛋白及VEGF165蛋白水平较pIRES-hBMP2转染组和pIRES-hVEGF165转染组及空载转染组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).组织学染色观察发现pIRES-hBMP2-hVEGF165转染组细胞碱性磷酸酶、骨胶原蛋白及骨钙素阳性率明显高于pIRES-hBMP2转染组、pIRES-hVEGF165转染组、空载转染组,差异有统计学意义(P<0.05).结论双基因转染后的BMSCs目的基因的表达良好,BMP2、VEGF165基因表达水平较单基因转染明显提高;双基因共转染SD大鼠BMSCs能够获得比单基因转染更优良的体外成骨能力.

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来源
《重庆医学》 |2020年第20期|3331-3336|共6页
作者
温洋; 陈丽媛; 沈师; 卓乃强;
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作者单位

四川省遂宁市中心医院骨科中心一病区 629000;

四川省遂宁市中心医院骨科中心一病区 629000;

西南医科大学附属医院骨与关节外科四川泸州 646000;

西南医科大学附属医院骨与关节外科四川泸州 646000;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类骨及骨骼生理学;
关键词
骨形态发生蛋白; 血管内皮生长因子; 基因转染; 骨髓基质干细胞;

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