PCR-SSCP检测白血病患者C/EBPξ基因突变方法学建立

程旻; 陶洋; 丁金国; 顾红兵

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目的建立一种快速、批量筛查白血病患者骨髓C/EBPξ基因外显子突变的多聚酶链反应-单链构象多态性(PCRSSCP)分析方法方法用Bio-Rad iCycler梯度PCR仪对25 μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶等浓度及反应条件进行优化,并用2％琼脂糖电泳检验产物质量.在此基础上,再对中性聚丙烯酰胺凝胶浓度、上样缓冲液种类、上样量、上样次数及相隔时间、PCR产物稀释倍数、电压、电泳温度等因素进行探讨.同时比较80个健康体检者外周血与20个胸外科良恶性肿瘤患者肋骨骨髓DNA的PCR-SSCP图谱.结果 25μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶浓度分别为1.5～2.0mM和1.0～1.5U,退火温度为54 ℃～57℃时PCR扩增效率高;应用8％～10％非变性聚丙烯酰胺凝胶,低离子强度(LIS)上样缓冲液,PCR产物稀释4～5倍,上样量为5～10μL,同一块凝胶相隔0.5～1.0小时可上样2次产物,电压为320V挂冰,室温或4℃电泳5～7小时,SSCP分析可得到较为满意的图谱.80例健康体检者外周血与20例正常肋骨骨髓DNA的C/EBPξ基因图谱相同.结论可以用正常体检者外周血DNA代替正常肋骨骨髓DNA行SSCP分析,作为C/EBPξ基因突变检测的对照图谱,两次上样的PCR-SSCP方法节约了试剂、时间、人力,可用于快速大量筛查白血病患者C/EBPξ基因突变.

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来源
《临床医学工程》 |2012年第12期|2123-2125|共3页
作者
程旻; 陶洋; 丁金国; 顾红兵;
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作者单位

江苏省镇江市第一人民医院检验科,江苏镇江212002;

江苏省镇江市第一人民医院检验科,江苏镇江212002;

江苏省镇江市第一人民医院检验科,江苏镇江212002;

江苏省镇江市第一人民医院检验科,江苏镇江212002;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类白血病;
关键词
C/EBPξ基因突变; PCR SSCP; 白血病;

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