SARS-CoV-2中和性纳米抗体的原核表达及中和活性检测

王海宁; 刘兴健; 高新桃; 李轶女; 沈兴家; 张志芳; 易咏竹

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SARS-CoV-2中和性纳米抗体的原核表达及中和活性检测

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纳米抗体(nanobody,Nb)作为目前已知的能与目标抗原结合的最小单位抗体,在生物医药、临床研究等方面具有良好的应用前景。根据大肠杆菌密码子偏好性优化合成严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2)中和性纳米抗体H11-D4基因,将其克隆到pET28a表达载体上后,转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)进行诱导表达,通过镍柱纯化、质谱分析、Western Blot鉴定H11-D4的表达情况并使用中和试验验证其中和活性。研究结果显示,纳米抗体H11-D4可成功在大肠杆菌中表达,最佳诱导条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L^(-1),37℃诱导5 h。H11-D4抗体的分子量大小约为17.9 kD,与预测值相符。经镍柱纯化后,产量为25.16 mg·L^(-1)。透析复性后利用TritonX-114快速有效地去除了内毒素,中和试验成功验证了H11-D4的中和活性(IC50)为171.1 nmol·L^(-1),研究结果可为纳米抗体的原核表达和新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)的预防及治疗提供基础数据支撑。

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来源
《生物技术进展》 |2022年第5期|754-759|共6页
作者
王海宁; 刘兴健; 高新桃; 李轶女; 沈兴家; 张志芳; 易咏竹;
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作者单位

江苏科技大学生物技术学院;

中国农业科学院蚕业研究所;

中国农业科学院生物技术研究所;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫学技术、设备及实验方法;
关键词
纳米抗体; 大肠杆菌; 新冠病毒; 中和试验;

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