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基于RhoA信号转导通路探讨半枝莲石油醚提取物对人三阴性乳腺癌细胞的影响

         
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目的:研究半枝莲石油醚提取物对EGF诱导的人三阴性乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)Ezrin和RhoA蛋白表达的影响,探讨其抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、分化的作用机制。方法:溶剂萃取法获得半枝莲石油醚提取物,通过Agilent HPLC-ESI-Q-TOF-MS MassHunter软件分析,于PubChem数据库中获取半枝莲石油醚提取物熊果酸的分子对接信息。采用分子对接技术对半枝莲石油醚提取物中熊果酸与RhoA蛋白受体的对接进行可视化分析。为探讨其抑制肿瘤细胞的分化、增殖机制,取对数生长期细胞分为7组,用含2%胎牛血清培养液进行饥饿培养24 h,给予30 ng/mL EGF分别干预30 min、24 h后,分别给予相应药物培养30 min,采用Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中RhoA、p-RhoA及Ezrin蛋白表达情况。结果:质谱分析显示,半枝莲石油醚提取物中主要包括长链脂肪酸和萜类成分。生物信息分子对接发现,熊果酸是半枝莲调控RhoA的有效活性成分。Western blotting结果显示,EGF诱导MDA-MB-231细胞30 min及24 h后p-RhoA和Ezrin蛋白相对表达量均明显升高(P0.05)。EGF可能以RhoA蛋白磷酸化的形式参与下游蛋白信号调控,增强肿瘤癌细胞中Ezrin蛋白表达,进而促进癌细胞侵袭和转移。结论:熊果酸是半枝莲调控RhoA的有效活性成分。半枝莲石油醚提取物可通过RhoA信号通路抑制MDA-MB-231细胞的增殖、转移和分化,进而对人三阴性乳腺癌起到治疗作用。

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