梨叶片原生质体制备方法的建立及其基因瞬时转化试验

高成昱; 王艺衡; 靳江周; 李涛; 李金斗; 周梦瑶; 张海霞; 马辉; 张玉星; 亓宝秀; 许建锋

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梨叶片原生质体制备方法的建立及其基因瞬时转化试验

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以‘新梨7号’梨叶片为材料,探究影响原生质体分离的主要因素,制备高产优质的叶肉原生质体,并进行基因瞬时转化和表达。将继代30 d的组培苗嫩叶在最佳酶解液(1.0%纤维素酶,0.1%果胶酶,0.4%离析酶,0.5 mol·L^(-1)甘露醇,20 mmol·L^(-1)KCl,20 mmol·L^(-1)MES,10 mmol·L^(-1)CaCl_(2),1.0 g·L^(-1)BSA)中酶解12 h,可制备出产量为1.09×10^(6)protopl·mL^(-1)、活力为90%的原生质体。将1~2μg·mL^(-1)pROK2-GFP质粒DNA通过40%PEG-4000介导转化至上述原生质体中并培养12 h,可以观察到GFP绿色荧光信号,转化率可达40%。

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来源
《园艺学报》 |2023年第5期|1141-1150|共10页
作者
高成昱; 王艺衡; 靳江周; 李涛; 李金斗; 周梦瑶; 张海霞; 马辉; 张玉星; 亓宝秀; 许建锋;
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作者单位

河北农业大学园艺学院;

河北保定071051;

河北省梨技术创新中心;

河北保定071051;

英国利物浦约翰摩尔大学药学和分子生物学学院;

英国利物浦L33AF;

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正文语种 chi
中图分类梨;
关键词
梨; 叶片; 原生质体制备; 瞬时转化;

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