敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建

孙瑜; 陈红霞; 齐永; 李素芹; 沈万鹏; 饶继先; 李佳萌; 李晓玲; 李越希

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目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞。采用Western blot法对敲除效果进行鉴定。结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确。Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白。结论成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2018年第11期|1197-1200|共5页
作者
孙瑜; 陈红霞; 齐永; 李素芹; 沈万鹏; 饶继先; 李佳萌; 李晓玲; 李越希;
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作者单位

南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;

江苏南京210029;

南京军区军事医学研究所;

江苏南京210002;

中国药科大学生命科学与技术学院;

江苏南京210009;

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正文语种 chi
中图分类 Q28;
关键词
SOSS基因; 基因敲除; HeLa细胞株; CRISPR/Cas9n双切口酶;

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