LRP16结合poly(ADP-ribose)关键位点的识别

柏苗苗; 王春萌; 伍志强; 梅倩; 李小雷; 李祥; 赵亚力; 韩为东

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LRP16结合poly(ADP-ribose)关键位点的识别

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LRP16作为macro domain家族成员,可识别、结合poly(ADP-ribose),参与DNA损伤修复的早期反应.但究竟LRP16通过其何种氨基酸位点识别、结合poly(ADP-ribose)(PAR)尚不十分清楚.本研究首先通过对LRP16蛋白的结构分析,查找LRP16结合PAR的候选氨基酸位点,然后利用丙氨酸扫描技术构建系列LRP16(点)突变体,并且进行原核蛋白表达与纯化,将获得的蛋白质进行斑点杂交实验,检测LRP16突变体蛋白与PAR的结合活性.测序结果显示,LRP16点突变基因序列成功插入到原核表达载体pGEX-6p-1中;斑点杂交实验显示,LRP16中第160位D和第161位I突变成A后,其与PAR结合能力明显减弱,而第181位G、183位V、184位D同时突变为A,LRP16与PAR的结合活性有部分减弱.结果表明,LRP16中第160位和第161位的氨基酸是其与PAR结合的关键位点.

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2013年第11期|1048-1053|共6页
作者
柏苗苗; 王春萌; 伍志强; 梅倩; 李小雷; 李祥; 赵亚力; 韩为东;
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作者单位

解放军总医院基础医学研究所分子生物学研究室;

北京100853;

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正文语种 chi
中图分类生物大分子的结构和功能;核糖（醣）核酸（RNA）;
关键词
LRP16; 多聚腺苷二磷酸核糖; 丙氨酸扫描;

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