Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能评价

王志蕊; 刘西梅; 周荆荣; 郑新民; 魏庆信; 董发明; 毕延震

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Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能评价

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选择标记的使用和残留可引起消费者对转基因生物环境安全和产品安全的担忧,建立消除选择标记的有效对策甚为必要.本研究的目标是评价Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能,为猪安全转基因研究提供实验依据和技术支撑.本文所用的打靶载体ΔMSTN含有LoxP位点锚定的选择标记表达框(LoxP-CMV-NeoR-IRES-EGFP-LoxP).经电穿孔将该打靶载体导入猪肾PK15细胞,经G418筛选,获得稳定整合该载体、EGFP表达均一的单克隆细胞系.将Cre重组酶表达载体pTurbo-Cre导入该细胞系,借助流式分选(FACS)、终点PCR、荧光定量PCR、TA克隆与测序等手段,证明Cre-LoxP重组系统可在猪细胞内高效介导内源性选择标记基因的删除反应,EGFP水平的删除效率达到46.1%,DNA水平的删除效率则达到97%.本文的研究结果为消除选择标记的安全隐患提供了可靠的解决方案,为建立猪安全转基因技术提供了重要的科学依据.

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2014年第2期|194-201|共8页
作者
王志蕊; 刘西梅; 周荆荣; 郑新民; 魏庆信; 董发明; 毕延震;
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作者单位

河南科技大学动物科技学院;

洛阳471003;

湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室;

武汉430064;

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正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
Cre; LoxP; 安全转基因; 选择标记; 绿色荧光蛋白; 删除;

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