仙台病毒BB1株6个编码基因的克隆及表达

张海凤; 杨宇; 董小岩; 吴小兵

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仙台病毒BB1株6个编码基因的克隆及表达

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在仙台病毒BB1株全基因组序列测定的基础上,用反转录和PCR方法获得了核蛋白基因(N),磷蛋白基因(P),神经血凝素基因(HN),基质蛋白基因(M)、融合蛋白基因(F)和聚合酶蛋白基因(L)等6个编码基因全长克隆;测序结果表明,其序列与Genbank中登录的序列(DQ219803)完全一致。为了提供仙台病毒基因组载体拯救和包装所需的反式作用蛋白,将N、P、M、F、HN和L分别克隆到腺病毒穿梭表达载体pDC316上,将它们分别与腺病毒基因组质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,获得了6种复制缺陷性重组腺病毒Ad5-N、Ad5-P、Ad5-M、Ad5-F、Ad5-HN和Ad5-L。酶切结果表明6种重组腺病毒穿梭质粒构建正确;用PCR方法证明所获得的6种重组腺病毒分别携带了上述6个编码基因;用重组腺病毒感染LLC-MK2细胞后用Western blotting和免疫荧光方法检测到了相应仙台病毒编码基因的表达。本研究为仙台病毒BB1株全长基因组的拼接和病毒载体包装系统组建打下了基础。

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来源
《病毒学报》 |2009年第3期|213-219|共7页
作者
张海凤; 杨宇; 董小岩; 吴小兵;
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作者单位

中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室;

北京100052;

中国检验检疫科学研究院;

北京100123;

北京五加和分子医学研究所有限公司;

北京100176;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类其他病毒;
关键词
副粘病毒科; 仙台病毒; BB1株; 腺病毒载体;

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